本文關(guān)鍵詞：朊蛋白在阿爾茨海默病和正常小鼠視網(wǎng)膜組織上的表達(dá)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)觀察細(xì)胞型朊蛋白(celular prion protein,Pr Pc)在阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠和正常小鼠視網(wǎng)膜組織上的表達(dá)情況,分析Pr Pc與AD小鼠視網(wǎng)膜組織改變之間存在的關(guān)系,為下一步研究Pr Pc在AD視網(wǎng)膜退行性病變上的發(fā)病機(jī)制研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),也為阿爾茨海默病的早期診斷和早期治療提供一定的研究方向。方法:選取6月齡大小的雙轉(zhuǎn)基因(APP/PS1)阿爾茨海默病C57小鼠30只作為實(shí)驗(yàn)組,6月齡大小30只正常健康的C57小鼠作為對(duì)照組,雌雄各半,相同的飼養(yǎng)環(huán)境。將小鼠過(guò)量麻醉處死后,暴露眼球,分離瞼結(jié)膜,剪斷視神經(jīng)取出眼球,在解剖顯微下迅速的取出視網(wǎng)膜,將視網(wǎng)膜放入EP管內(nèi),液氮凍存。首先通過(guò)HE染色技術(shù)觀察AD小鼠與正常小鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)上的差異;免疫熒光檢測(cè)Pr Pc在AD及正常小鼠視網(wǎng)膜組織上的表達(dá)情況,共聚焦顯微鏡觀察Pr Pc的亞細(xì)胞定位。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)兩組小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc基因的表達(dá)差異;蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)技術(shù)檢測(cè)兩組小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc蛋白的表達(dá)情況,利用上述的兩種實(shí)驗(yàn)方法以β-actin作內(nèi)參因子。分析Pr Pc在阿爾茨海默病的視網(wǎng)膜組織的病理改變中是否存在作用,對(duì)進(jìn)一步研究Pr Pc在阿爾茨海默病視網(wǎng)膜病變中的發(fā)病機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。結(jié)果:1.通過(guò)對(duì)AD小鼠及正常小鼠視網(wǎng)膜組織的HE染色,結(jié)果顯示:在視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)中,AD小鼠視網(wǎng)膜組織中的內(nèi)、外核層細(xì)胞數(shù)量較正常小鼠視網(wǎng)膜組織明顯減少,其視盤(pán)盤(pán)周神經(jīng)上皮層厚度較正常小鼠變薄。2.通過(guò)對(duì)AD小鼠及正常小鼠視網(wǎng)膜組織免疫熒光染色,結(jié)果顯示:AD小鼠及正常小鼠視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)Pr Pc表達(dá),但是AD小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常小鼠視網(wǎng)膜組織,其平均光密度值(MOD)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),Pr Pc主要分布于視網(wǎng)膜內(nèi)外叢狀層、光感細(xì)胞層及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層上,,共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)Pr Pc主要定位于細(xì)胞膜上。3.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜組織中內(nèi)參因子β-actin均表達(dá)較穩(wěn)定,證實(shí)本實(shí)驗(yàn)所用RT-PCR和Western Blot技術(shù)可靠,無(wú)明顯操作誤差;4.RT-PCR結(jié)果顯示:阿爾茨海默病小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc基因表達(dá)水平較正常小鼠視網(wǎng)膜組織明顯增強(qiáng),差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);Western blot結(jié)果顯示:阿爾茨海默病小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc蛋白表達(dá)水平較正常小鼠視網(wǎng)膜組織明顯增強(qiáng),差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.阿爾茨海默病小鼠視網(wǎng)膜和正常小鼠視網(wǎng)膜組織中均存在Pr Pc的表達(dá),且阿爾茨海默病小鼠視網(wǎng)膜的Pr Pc基因和蛋白表達(dá)強(qiáng)度均明顯強(qiáng)于正常視網(wǎng)膜組織。2.Pr Pc表達(dá)主要定位于視網(wǎng)膜內(nèi)外叢狀層、光感細(xì)胞層及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層上,Pr Pc亞細(xì)胞定位于細(xì)胞膜上。3.阿爾茨海默病組小鼠視盤(pán)盤(pán)周神經(jīng)上皮層厚度較正常組小鼠明顯變薄。4.Pr Pc與阿爾茨海默病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生存在相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞型朊蛋白 阿爾茨海默病 視網(wǎng)膜組織 C57小鼠
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料與方法13-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源及鑒定13
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組13
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑13-15
• 2.1.4 主要儀器與設(shè)備15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 2.2.1 小鼠視網(wǎng)膜組織標(biāo)本取材16
• 2.2.2 小鼠視網(wǎng)膜組織冰凍切片HE染色16-17
• 2.2.3 免疫熒光檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc蛋白表達(dá)17-18
• 2.2.4 RT-PCR觀察小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc基因表達(dá)18-20
• 2.2.5 Western Blot檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜組織中Pr Pc蛋白表達(dá)20-22
• 2.2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 第3章 結(jié)果23-30
• 3.1 HE染色結(jié)果23
• 3.2.免疫熒光檢測(cè)結(jié)果23-25
• 3.3 β-actin結(jié)果25-26
• 3.4 RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果26-27
• 3.5 Western blot法檢測(cè)結(jié)果27-30
• 第4章 討論30-34
• 4.1 朊蛋白的生物學(xué)特性30-31
• 4.2 朊蛋白相關(guān)疾病31-32
• 4.3 朊蛋白與阿爾茨海默病的相關(guān)性32-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 本學(xué)期畢業(yè)博士、碩士研究生公開(kāi)發(fā)表學(xué)術(shù)論文統(tǒng)計(jì)表51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 周瓊;劉章;陳娟;;細(xì)胞型朊蛋白在不同月齡小鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J];眼科新進(jìn)展;2015年02期

2 刁小龍;吳潤(rùn);;朊蛋白生理功能研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2012年02期

3 薛海波;肖世富;孫云;張明園;;腦脊液生物學(xué)標(biāo)志物診斷阿爾茨海默病與血管性癡呆[J];中國(guó)現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2007年03期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 于惠敏;大鼠視盤(pán)周?chē)窠?jīng)纖維層厚度的光學(xué)相干斷層掃描測(cè)量與組織學(xué)測(cè)量的相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：朊蛋白在阿爾茨海默病和正常小鼠視網(wǎng)膜組織上的表達(dá)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：279135