【摘要】：目的塵肺病尤其是矽肺,是我國當前最嚴重的一類危害職業(yè)人群生命和健康的職業(yè)病,有研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及自噬的功能障礙與包括器官纖維化在內(nèi)的很多疾病之間有聯(lián)系,細胞自噬也受到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑的調(diào)控,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPR)的3條信號通路:IRE1-XBP1、PERK-e IF2α和ATF6均可誘導(dǎo)細胞的自噬。但是,還沒有直接的證據(jù)說明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-自噬與矽肺纖維化之間的聯(lián)系。本研究通過收集矽肺患者肺AM細胞,添加3種UPR信號抑制劑,使用免疫印跡法(western blot)和RT-PCR技術(shù)初步探討含游離Si O2矽塵的刺激是否引起人肺AM的UPR、細胞自噬以及不同期別矽肺患者肺AM內(nèi)UPR程度的變化和自噬的強弱,為矽肺發(fā)病機制研究提供新的理論基礎(chǔ)。方法采用單純隨機抽樣方法,隨機選擇2013年8月至2014年1月在中國煤礦工人北戴河療養(yǎng)院進行大容量全肺灌洗治療的76例男性矽肺患者為研究對象。所有研究對象均依據(jù)GBZ 70-2009《塵肺病診斷標準》由中國煤礦工人北戴河療養(yǎng)院塵肺病診斷專家組集體診斷,并根據(jù)本研究課題的實驗?zāi)康脑O(shè)計合理的《接塵工人調(diào)查表》,調(diào)查研究對象的一般人口學資料、職業(yè)接觸史、既往史、現(xiàn)患史、治療史、吸煙史和塵肺病診斷情況等。實驗室研究:所有研究對象在全身麻醉狀態(tài)下進行大容量雙肺同期灌洗手術(shù),收集適量的支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF),分離純化AM后,針對定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上感應(yīng)并傳遞UPR信號的3個蛋白選擇對應(yīng)的抑制劑,將每例研究對象的細胞分為四個處理組:未處理組(對照組,只含培養(yǎng)基、不含抑制劑)、ATF6抑制劑組、PERK抑制劑組和IRE1抑制劑組,各組添加相應(yīng)抑制劑后繼續(xù)培養(yǎng)24h收獲AM。采用Western blot方法和RT-PCR技術(shù)檢測AM中的UPR通路相關(guān)蛋白GRP78、自噬標記蛋白Beclin1和LC3蛋白及m RNA的表達規(guī)律及作用。結(jié)果1未處理組各期別矽肺患者AM中目的蛋白的表達水平:矽肺壹期、貳期和叁期患者AM的3個蛋白指標均高于觀察對象(P0.05),矽肺貳期和叁期均高于矽肺壹期患者(P0.05),矽肺叁期患者AM的GRP78蛋白水平低于矽肺貳期(P0.05);矽肺叁期患者AM的LC3和Beclin1蛋白水平均高于矽肺貳期(P0.05)。2矽肺患者AM中目的蛋白水平影響因素分析:研究發(fā)現(xiàn),接塵工齡≥15年的Beclin1和LC3表達水高于接塵工齡15年組(P0.05),開始接塵年齡≥25歲GRP78表達水平高于25歲組(P0.05)。脫塵組3個蛋白的表達水平均高于未脫塵組。GRP78蛋白相對表達水平與吸煙指數(shù)有關(guān)聯(lián)(P0.05)。3各組矽肺患者AM目的蛋白表達水平:4組矽肺叁期患者AM中Beclin1和LC3蛋白表達水平隨矽肺期別的增加而升高。不同抑制劑組中矽肺叁期患者AM的3種目的蛋白表達量均高于觀察對象(P0.05);各抑制劑組中的矽肺壹期、叁期GRP78蛋白水平與未處理組壹期、叁期比較略有下降(P0.05);抑制劑組中矽肺貳期、叁期矽肺患者AM的Beclin1的表達量均低于與未處理組貳期、叁期(P0.05);抑制劑組矽肺壹期、貳期和叁期患者LC3的表達量均低于未處理組矽肺壹期、貳期和叁期,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4各組矽肺患者AM目的m RNA表達情況:4組矽肺患者貳期和叁期AM的GRP78 m RNA和Beclin1m RNA均高于觀察對象,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。抑制劑組矽肺患者AM的GRP78 m RNA和Beclin1 m RNA整體水平較未處理組表達都略有下降。IRE1抑制劑組矽肺壹期患者AM的Beclin1 m RNA和貳期患者AM的GRP78m RNA與未處理組相應(yīng)期別比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論1矽肺患者肺泡巨噬細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度隨矽肺期別的增加呈增強的趨勢。2矽肺患者肺泡巨噬細胞自噬程度隨矽肺期別的增加而升高。3抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激主要3條通路后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與肺泡巨噬細胞自噬程度減輕,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路對矽肺患者肺泡巨噬細胞自噬發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R135.2

【參考文獻】

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本文編號：2743414