【摘要】：目的：探討外寒環(huán)境因素對正常及肺氣虛大鼠一般情況、肺組織結(jié)構(gòu)學(xué)、肺組織細胞蛋白差異表達的影響；探究寒邪致病的機理所在。 方法：1.選取40只SD大鼠隨機分為正常組、寒邪組、肺氣虛組、肺氣虛加寒邪組，每組10只。肺氣虛組模型復(fù)制采用氣管注射脂多糖與煙熏的復(fù)合方法。造模28天后，肺氣虛加寒邪組與寒邪組給予寒環(huán)境一周，于造模前、后觀察記錄各組大鼠精神活動、毛色、進食量、飲水量、體重、皮膚、關(guān)節(jié)及大便情況，連續(xù)觀察7天。2.寒環(huán)境造模完成后各組大鼠于麻醉前12小時禁食、禁水，稱量體重。麻醉后開胸取出左肺組織2±0.1g/只，放入10%甲醛溶液中固定，梯度脫水，石蠟切片，常規(guī)HE染色，光鏡觀察結(jié)果。3.寒環(huán)境造模完成后各組大鼠于麻醉前12小時禁食、禁水，稱量體重。麻醉后開胸取出左肺組織10mg/只,每組取3只，進行雙向電泳實驗、雙向凝膠電泳圖象分析，，肽質(zhì)量指紋圖譜與電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)。 結(jié)果：1.與正常組比較，肺氣虛組大鼠進食量、飲水量均明顯減少，體重增長明顯減慢（P0.05或P0.01）。與寒邪組、肺氣虛組比較，肺氣虛加寒邪組大鼠進食量、飲水量明顯減少，且體重都較給予外環(huán)境前減輕（P0.05）。肺氣虛組大鼠在精神狀態(tài)、活動、毛色、皮膚、關(guān)節(jié)及大便等方面均有一定影響，而肺氣虛加寒邪組表現(xiàn)尤為明顯。 2.肺氣虛組、寒邪組大鼠病理組織切片則顯示肺部出現(xiàn)明顯的損傷，肺泡內(nèi)可見明顯的水液潴留，毛細血管充血，炎癥細胞浸潤。而寒邪加肺氣虛大鼠則見間質(zhì)少量炎細胞侵潤，肺泡腔內(nèi)泡沫細胞聚集，并有肺膿腫形成。 3.正常組、寒邪組、肺氣虛組與肺氣虛加寒邪組每組選三個樣本進行差異蛋白組學(xué)比較，共計六組，對六對差異蛋白圖譜進行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,鑒定出65個蛋白,它們在大鼠肺組織蛋白中20個表達上調(diào)、45個表達下調(diào)。在四組2-DE凝膠上從表達差異蛋白質(zhì)點中選取點清晰且表達水平改變明顯的蛋白質(zhì)點作為最終質(zhì)譜鑒定的對象，利用PMF的方法鑒定了7個與肺氣虛證可能相關(guān)的差異表達的蛋白質(zhì)、10個與寒邪犯肺可能相關(guān)的差異表達的蛋白質(zhì)。其中轉(zhuǎn)膠蛋白、真核翻譯起始因子與肺氣虛證有相關(guān)性，而熱休克蛋白70、血清蛋白前體、纖維蛋白原、蘋果酸脫氫酶、檸檬酸合酶則和“內(nèi)外合邪”大鼠（寒邪作用于肺氣虛機體）可能有相關(guān)性。 結(jié)論:1.寒邪對正常組及肺氣虛組大鼠的一般情況均有影響，對肺氣虛模型大鼠影響更為明顯。2.對正常組及肺氣虛大鼠肺組織有不同的損害，且寒邪在一定程度上能明顯加重肺氣虛大鼠肺組織損害的程度。3.初步證實內(nèi)外因素作用下差異蛋白質(zhì)交集的存在；并且此種差異蛋白質(zhì)的功能主要涉及機體激素調(diào)節(jié)、免疫應(yīng)答、信號傳導(dǎo)、細胞骨架、物質(zhì)代謝等方面。該結(jié)果為研究寒邪傷肺的蛋白質(zhì)學(xué)致病機制提供了科學(xué)研究基礎(chǔ)資料，亦為今后進一步研究疾病的發(fā)生發(fā)展奠定了的蛋白組學(xué)理論基礎(chǔ)，將來也有可能為臨床上疾病特別是外感疾病的診斷提供分子生物學(xué)方面的診斷標準，具有理論創(chuàng)新和臨床指導(dǎo)意義。
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【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R256.1

【參考文獻】

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本文編號：2489254