【摘要】：背景與目的：非小細胞肺癌(Non-small-cell lung cancer, NSCLC)是臨床上最常見、惡性程度最高的腫瘤之一,位居全球惡性腫瘤死因的首位。惡性胸腔積液(Malignant pleural effusion, MPE)是NSCLC患者預后不良的重要原因。目前,雖然臨床上針對MPE的治療方法很多,但是總體來說至目前為止治療效果仍不盡如人意。血管內皮生長因子A (Vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)在惡性胸腔積液的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。VEGF-A與VEGF受體結合后可以通過一系列機制刺激血管內皮細胞增殖、遷徙,并增強毛細血管通透性,進而促進了MPE的產(chǎn)生及發(fā)展。因此,科研工作者們致力于尋找新的藥物抑制VEGF-A進而抑制MPE的形成。雷公藤內酯醇(Triptolide,TL)是從衛(wèi)矛科植物雷公藤中分離出的活性最高的環(huán)氧化二萜內酯化合物。大量研究證實雷公藤內酯醇具有抗炎、抗腫瘤、抗血管生成和抗生育等作用。作為從中藥中提取的化學活性單體,雷公藤內酯醇價格低廉,毒副反應小,病人耐受性好,現(xiàn)已經(jīng)應用于臨床用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎炎、風濕性關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎等多種自身免疫和炎性疾病。近期有研究發(fā)現(xiàn),雷公藤內酯醇可以抑制腫瘤VEGF-A表達,并且抑制血管的生成。綜上所述,本研究擬通過體內外實驗觀察雷公藤內酯醇對LLC細胞功能的影響及其對裸鼠惡性胸腔積液的治療作用,并探討其可能機制。方法：(1)不同濃度TL處理Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)細胞后,應用噻唑藍(MTT)及臺盼藍染色法檢測TL對LLC細胞增殖、存活的影響。(2)分別用0、50、100.200nmol/ml的TL作用于LLC細胞24小時(h),然后用Western blotting法檢測細胞中VEGF-A的蛋白表達水平。(3)取對數(shù)生長期的LLC細胞株,建立惡性胸腔積液裸鼠模型。隨機將裸鼠分為2組,于建模后第3天開始,治療組給予右側胸腔注射0.4mg/kg的TL,對照組右側胸腔內注射50μl含0.01% DMSO的生理鹽水。隔日一次。接種腫瘤細胞后的第14天,給予裸鼠行胸部CT檢查,觀察胸腔積液的形成情況。第20天用水合氯醛過量麻醉處死裸鼠,用lml注射器抽吸裸鼠胸腔積液,計算兩組裸鼠胸水的平均體積；胸水離心后,收集上清行ELISA法檢測胸腔積液中VEGF-A表達水平；收集離心后的胸水沉渣涂片,行改良Giemsa法染色。解剖裸鼠,暴露胸腔,計數(shù)腫瘤結節(jié)數(shù)量,收集腫瘤結節(jié)稱重。石蠟包埋腫瘤結節(jié)切片行HE染色及免疫組化檢查,觀察微血管密度及VEGF-A的表達差異。結果：(1)TL抑制LLC細胞增殖,并且呈濃度和時間依賴性,IC50=64.741nmol/ml。 (2) Western blotting結果提示TL抑制LLC細胞中VEGF-A的蛋白表達水平,隨著TL濃度提高,VEGF-A表達逐漸減少。(3)胸部CT檢查結果提示裸鼠胸腔內有積液形成。處死裸鼠后可抽吸到血性不凝固的胸腔積液,TL治療組胸水平均體積為230.83±46.05l,對照組胸水平均體積為350.33±62.35μl,差異有統(tǒng)計學意義。打開裸鼠胸腔可以看到腫瘤結節(jié)遍及臟、壁層胸膜,TL治療組和對照組平均腫瘤結節(jié)數(shù)目分別為12.50±2.26、19.17±2.32,P0.01。胸腔積液上清ELISA檢查結果發(fā)現(xiàn),VEGF-A在TL治療組表達減少(308.50±49.89 ng/ml VS 430.67±34.58 ng/mlP0.001)。腫瘤組織免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)VEGF-A在兩組中的表達分別為2.50±1.05、4.83±2.32,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),微血管密度(Micro vesse density, MVD)從13.17±2.71減少到8.83±2.04 (P0.05)。結論：(1)TL可顯著抑制LLC細胞增殖,減少細胞VEGF-A表達；(2)TL可以抑制MPE的發(fā)生發(fā)展,有望成為治療MPE的有效藥物；(3)TL可能是通過下調VEGF-A表達,抑制腫瘤新生血管生成的機制發(fā)揮抑制惡性胸腔積液的作用。
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【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R96

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1 楊春欣,周庭川,秦萬章;雷公藤內酯醇不同季節(jié)的含量變化[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2001年01期

2 胡可斌,劉志紅,劉棟,黎磊石;雷公藤內酯醇抑制血管內皮細胞生長因子的表達與合成[J];中華醫(yī)學雜志;2001年18期

3 王曙東,滕英博,謝虞;不同吸附條件對雷公藤內酯醇含量的影響[J];南京中醫(yī)藥大學學報;2005年05期

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本文編號：2459900