發(fā)布時間：2017-12-10 11:05

  本文關(guān)鍵詞：電針對慢性痛大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒成分相關(guān)受體CRF1R等表達影響

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【摘要】：研究背景針刺是祖國醫(yī)學(xué)幾千年發(fā)展中重要的一部分,針灸治療疼痛類疾病有著獨有的優(yōu)勢。一項調(diào)查表明：針灸優(yōu)勢病種有腰痛病、頭痛病、項痹病、肩凝癥、痛經(jīng)、胃脘痛等等。在疼痛治療上,針灸療效明顯。臨床上發(fā)現(xiàn)疼痛常伴隨焦慮、抑郁等情緒表現(xiàn),兩者相互影響,往往易加重病情。針刺對改善抑郁、焦慮等疾病也有較好效果。但針刺對緩解疼痛伴隨的厭惡情緒是否有效,還不清楚。近年來,采用功能性磁共振成像等技術(shù),發(fā)現(xiàn)在大腦中樞系統(tǒng)存在一些參與疼痛不同層面(包括辨識、情緒和情感)加工處理的腦內(nèi)結(jié)構(gòu),包括大腦皮層初級及次級軀體感覺區(qū)、島葉、前扣帶回、前額葉皮質(zhì)及丘腦結(jié)構(gòu)；以及杏仁核、基底神經(jīng)節(jié)、小腦、海馬、頂葉和顳葉內(nèi)的一些相關(guān)的皮質(zhì)區(qū)等,這些區(qū)域結(jié)構(gòu)被稱為“疼痛神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)pain neuromatrix(或神經(jīng)矩陣)”。這些腦區(qū)共同參與疼痛信息在腦內(nèi)的加工活動。杏仁核是該網(wǎng)絡(luò)中調(diào)節(jié)情緒和應(yīng)激的重要中樞核團。研究表明：其參與疼痛的情緒加工,促進慢性疼痛的產(chǎn)生和維持。其內(nèi)部結(jié)構(gòu)中有多種生物活性分子參與疼痛的調(diào)節(jié)。其中,促皮質(zhì)釋放因子(CRF)是中樞系統(tǒng)內(nèi)重要的應(yīng)激激素,調(diào)節(jié)人體內(nèi)臟活動和情緒反應(yīng)。谷氨酸(Glu)是主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),與NMDA等受體結(jié)合產(chǎn)生生物活性,參與疼痛的產(chǎn)生和發(fā)展。Y氨基丁酸(GABA)是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì),其受體是臨床多種鎮(zhèn)痛藥物的治療靶點,這些物質(zhì)共同參與了大腦中樞疼痛信息的調(diào)控。有學(xué)者研究針刺對人體大腦的影響,通過fMRI技術(shù)發(fā)現(xiàn)在疼痛狀態(tài)下,大腦多個腦區(qū)處于激活狀態(tài),而針刺過程中,呈現(xiàn)負(fù)激活狀態(tài)。如海馬、杏仁核等邊緣系統(tǒng)區(qū)域。我們前期的研究表明海馬和下丘腦膽堿能系統(tǒng)參與針刺的鎮(zhèn)痛過程,而杏仁核與海馬同屬于大腦邊緣系統(tǒng),參與人體情緒、記憶等生理活動。因此,本實驗在慢性痛負(fù)性情緒模型大鼠尚,觀察電針治療后,杏仁核內(nèi)情緒相關(guān)的CRF受體、興奮性氨基酸Glu受體N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、抑制性氨基酸GABA受體發(fā)生的變化,來探討針刺緩解慢性神經(jīng)痛大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒成分變化的機制,為臨床針刺治療疼痛疾病提供理論依據(jù)。材料與方法第一部分實驗：36只Wistar大鼠分2批進行,分別隨機分各3組：正常對照組(NOM)、CCI模型組(CCI)、電針組(EA+CC)、負(fù)性情緒模型組(NA)、電針加負(fù)性情緒組(EA+NA)。行坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)造成慢性神經(jīng)痛模型,手持接通電針儀的針灸針反復(fù)刺激CCI大鼠足底造成動物厭惡反應(yīng)模型。電針雙側(cè)“足三里”-“陽陵泉”穴,每日1次,共7天。痛覺測定儀檢測大鼠足底熱痛閾,計算雙足縮腿反應(yīng)潛伏期差值(PWLD);用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測杏仁核組織促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體亞型CRF-1R、CRF-2R,谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體亞型NR2A、NR2B及Y-氨基丁酸受體亞型GABAa、GABAc基因的相對表達量。第二部分實驗：本次實驗使用32只Wistar大鼠,隨機分為4組：正常對照組,CCI+NA(負(fù)性情緒negative affection)模型組,CCI+NA+電針(EA)組CCI+NA+麻醉電針(AEA)組,每組8只。行坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后,對動物連續(xù)進行3天足底電刺激造成條件性位置偏惡(conditioned place aversion, CPA,負(fù)性情緒)模型。電針和麻醉狀態(tài)下電針雙側(cè)“足三里”-“陽陵泉”穴(1mA,2/15Hz),每日1次,共7天。痛覺測定儀檢測大鼠足底熱痛閾,計算雙足縮腿反應(yīng)潛伏期差值(PWLD);條件位置厭惡設(shè)備記錄大鼠在條件控制箱停留時間(CPAs);用蛋白質(zhì)印跡法(WB)檢測杏仁核組織內(nèi)CRF1R, CRF2R,NMDA-NR2B, mGluR7,以及GABAA-α2, GABABR2受體蛋白表達量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析所有數(shù)據(jù)為計量資料,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示,用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,實驗數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,組間兩兩比較選用LSD檢驗,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1)電針(EA)對慢性痛負(fù)性情緒大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒相關(guān)CRF受體等基因表達的影響與正常組相比,CCI、負(fù)性情緒組PWLD均顯著增加(P0.05),分別與兩模型組比，，電針7天后,電針組與電針加負(fù)性情緒組PWLD顯著下降(P0.05).顯示出明顯鎮(zhèn)痛效應(yīng)。PCR的結(jié)果表明：與正常組比較,CCI模型組CRF-1R、CRF-2R、NR2A、NR2B受體基因表達量均顯著增加(P0.05),GABAaR及GABAcR基因表達變化不明顯(P0.05),而負(fù)性情緒組6個指標(biāo)基因表達量均顯著降低(P0.05)。分別與兩模型組比,電針組CRF-2R、NR2A、NR2B基因表達量顯著降低(P0.05),負(fù)性情緒動物電針組除CRF-1R表達相對升高(P0.05),其他基因表達量均顯著增加(P0.05)。2)電針(EA)對慢性痛負(fù)性情緒大鼠杏仁核內(nèi)痛感覺和情緒相關(guān)CRF受體等蛋白表達的影響與正常組相比,條件位置厭惡(CPA)模型建立后,負(fù)性情緒模型組和兩電針組PWLD值均顯著增加(P0.001)；與模型組相比,電針組和麻醉電針組PWLD差值在電針5天和7天后均顯著下降(P0.001)。條件位置厭惡實驗結(jié)果表明：CPA模型建立后,與正常組比較,負(fù)性情緒組和兩電針組在條件控制箱停留時間明顯縮短P0.001)；與模型組相比,電針和麻醉電針組在電針7天后在條件控制箱內(nèi)停留時間延長,而電針組停留時間顯著增加P0.001),這表明電針和麻醉電針可以起到顯著的鎮(zhèn)痛作用,其中電針可以抑制疼痛厭惡情緒,麻醉電針無顯著效應(yīng)。Western blot實驗結(jié)果表明：與正常組相比,模型組、兩電針組大鼠杏仁核內(nèi)CRF-1R、CRF-2R、NR2B、mGluR7、GABAA及GABAB蛋白表達水平均無顯著變化(P0.05)。小結(jié)1、重復(fù)電針足三里、陽陵泉可明顯減少神經(jīng)性疼痛和負(fù)性情緒在CCI和CCI負(fù)性情緒動物2、電針可對慢性痛和負(fù)性情緒大鼠產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與其下調(diào)杏仁核內(nèi)CRF-1R、CRF-2R、NR2A、NR2B受體mRNA,上調(diào)負(fù)性情緒大鼠CRF-2R、NR2A、NR2B、 GABAa和GABAc受體mRNA的表達有關(guān)。3、電針足三里-陽陵泉對疼痛誘導(dǎo)的厭惡情緒大鼠杏仁核內(nèi)CRF-1R、CRF-2R, NR2B, mGluR7, GABAA和GABAB受體蛋白表達無顯著效應(yīng),其結(jié)果有待進一步
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R245

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：1274211