本文關(guān)鍵詞：鹽酸小檗堿對(duì)T2DM大鼠腸道菌群及血內(nèi)毒素水平的影響

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【摘要】：目的:觀察2型糖尿病(T2DM)大鼠成模過(guò)程中血漿內(nèi)毒素水平與胰島素抵抗的關(guān)系;觀察鹽酸小檗堿干預(yù)T2DM大鼠的療效,及其對(duì)宿主腸道菌群結(jié)構(gòu)和血漿內(nèi)毒素水平的影響,探討鹽酸小檗堿治療T2DM大鼠的作用機(jī)制。方法:選擇健康的雄性SD大鼠66只,出生年齡均為6-8周,體重180g-200g,隨機(jī)分為兩組:正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱NC組,n=24)和T2DM組(簡(jiǎn)稱T2DM組,n=42)。NC組大鼠普通飼料喂養(yǎng)。T2DM組大鼠經(jīng)高糖高脂膳食喂養(yǎng)12周后,隔夜禁食8小時(shí)后于腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(STZ),劑量為30mg/kg,每隔2日于鼠尾處取血測(cè)大鼠的空腹血糖(FBG),FBG7.8mmol/L則認(rèn)為造模成功,如連續(xù)2次以上FBG7.8mmol/L則認(rèn)為造模失敗。高糖高脂飼料配方:基礎(chǔ)飼料65%、豬油10%、蔗糖15%、干蛋黃10%。于T2DM大鼠成模過(guò)程中,即高糖高脂飼料喂養(yǎng)第4、8周時(shí),以及成模后,分別隨機(jī)選取NC組和T2DM組各6只大鼠,禁食8小時(shí)后給予20%烏拉坦0.4ml/100g麻醉大鼠后,測(cè)定大鼠體重,并經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,無(wú)菌條件下分離血漿2ml分裝于無(wú)菌EP管內(nèi),同時(shí)分離血清,上述標(biāo)本均于-80℃凍存,留取部分肝臟右葉組織,置于包埋盒內(nèi)迅速投入10%中性福爾馬林液24小時(shí)后制備臘塊。T2DM組成功獲得T2DM大鼠20只,取其中體重相近的18只大鼠隨機(jī)分為持續(xù)高糖高脂對(duì)照組(簡(jiǎn)稱HSHF組,n=6,繼續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng))、單純飲食干預(yù)組(簡(jiǎn)稱干預(yù)I組,n=6,改為普通飼料喂養(yǎng))、鹽酸小檗堿干預(yù)組(簡(jiǎn)稱干預(yù)II組,n=6,改為普通飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上給予鹽酸小檗堿200mg/kg/d灌胃)。干預(yù)8周后,與正常對(duì)照組大鼠一起同上處理,測(cè)定大鼠體重,留取血漿、血清凍存于-80℃冰箱,制備肝臟右葉組織臘塊。同時(shí)留取少量結(jié)腸內(nèi)糞便,取2ml置于Rnase EP管內(nèi)液氮冷凍30分鐘后移置-80℃冰箱保存。上述血標(biāo)本同批測(cè)定以下指標(biāo),鱟試劑顯色基質(zhì)法測(cè)血漿內(nèi)毒素(LPS),免疫濁度法測(cè)血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG),放免法測(cè)空腹胰島素(FINS),計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMAIR),計(jì)算公式:FPG(mmol/L)×FINs(m IU/L)/22.5。RT-PCR測(cè)定糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌的含量。肝臟蠟塊行HE染色,觀察肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果:1高糖高脂飲食聯(lián)合STZ誘發(fā)大鼠T2DM形成過(guò)程中胰島素抵抗程度與血內(nèi)毒素水平之間的關(guān)系:1.1第4周末,與NC組相比,T2DM組大鼠體重增加,ALT、TG、CRP、LPS水平升高,FPG、FINS及HOMA-IR無(wú)明顯變化,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T2DM組大鼠的肝臟病理切片可見(jiàn)以小泡性脂滴為主的肝細(xì)胞脂肪變性,氣球樣變。1.2第8周末,與NC組相比,T2DM組大鼠體重增加,ALT、TG、CRP、LPS水平均升高,FPG、FINS及HOMA-IR水平輕度增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T2DM組大鼠肝臟病理切片觀察見(jiàn)以大泡性脂滴為主的肝細(xì)胞脂肪變性,氣球樣變。1.3第14周末,與NC組相比,T2DM組大鼠毛色無(wú)光澤,活動(dòng)少,體重增加較為顯著,ALT、TG、CRP、LPS水平顯著升高,FPG、FINS顯著升高,HOMAIR增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T2DM組大鼠肝臟組織病理切片觀察見(jiàn)肝細(xì)胞呈彌漫性空泡樣脂肪變性,肝細(xì)胞脂肪變性,氣球樣變,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),炎癥程度加重。1.4血LPS水平與IR程度之間呈正相關(guān),r=0.740,P0.01。2.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM可能的作用機(jī)制:2.1鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠的療效:與正常對(duì)照組(NC組)相比,干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均高于NC組(P0.05);肝臟病理切片可見(jiàn):肝細(xì)胞脂肪變性程度明顯于NC組。與持續(xù)高糖高脂對(duì)照組(HSHF組)比較,干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均低于HSHF組(P0.05);肝組織病理切片示:肝細(xì)胞脂肪變性,氣球樣變,少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)病變較HSHF組減輕。與干預(yù)I組相比,干預(yù)II組HOMA-IR、CRP、LPS減少顯著(P0.05);肝細(xì)胞脂肪變性程度明顯改善于干預(yù)I組,炎癥浸潤(rùn)顯著減少。2.2鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后內(nèi)毒素水平的變化:與NC組相比,干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS均高于NC組(P0.05);與HSHF組比較,干預(yù)I組、干預(yù)II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS均低于HSHF組(P0.05);與干預(yù)I組相比,干預(yù)II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS顯著減少(P0.05)。2.3鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后腸道菌群的變化2.3.1鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后革蘭氏陰性菌大腸桿菌屬的變化:與NC組相比,干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少(P0.05);與HSHF組相比,干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少(P0.05);與干預(yù)Ⅰ組相比,干預(yù)Ⅱ組大腸桿菌屬減少顯著(P0.05)。2.3.2鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后益生菌乳桿菌屬和雙歧桿菌屬的變化:與NC組相比,干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加(P0.05);與HSHF組相比,干預(yù)Ⅰ組、干預(yù)Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加(P0.05);與干預(yù)Ⅰ組相比,干預(yù)Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加顯著(P0.05)。結(jié)論:1長(zhǎng)期高糖高脂飲食引起大鼠體內(nèi)血LPS水平輕度升高,誘發(fā)體內(nèi)慢性低度炎癥,并至肥胖、IR,STZ注射后,胰島素分泌相對(duì)不足,T2DM產(chǎn)生。2鹽酸小檗堿治療T2DM大鼠有效,其可能的部分作用機(jī)制是通過(guò)改善腸道菌群結(jié)構(gòu),減少血LPS水平進(jìn)入機(jī)體,從而緩解內(nèi)毒素血癥,進(jìn)而達(dá)到治療T2DM的目的。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：1250033