本文關(guān)鍵詞：水痘—帶狀皰疹病毒臨床分離株基因型別分析與流行病學(xué)調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 目的:首先,利用限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA測序方法,對從水痘或帶狀皰疹病人皮膚皰疹液中分離、鑒定后獲得的水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)臨床分離株的基因型進(jìn)行分析,研究該病毒的分子流行病學(xué)特征,明確合肥地區(qū)VZV臨床分離株的主要基因型及其與國外各地區(qū)基因型的區(qū)別,并進(jìn)一步分析感染是由疫苗株(v-Oka)還是野毒株引起的,同時(shí)了解可能的疫苗反應(yīng)和疫苗株在水痘敏感人群的傳播狀況及病毒的進(jìn)化狀態(tài)。 其次,應(yīng)用膜抗原熒光抗體試驗(yàn)(FAMA)對從臨床收集的血清標(biāo)本進(jìn)行分析,研究VZV的血清流行病學(xué)特點(diǎn),根據(jù)正常人群中VZV的流行現(xiàn)狀,為水痘預(yù)防措施的制定提供依據(jù)。 方法:從臨床采集水痘或帶狀皰疹患者皮膚水皰液共36份,將其接種至人胚胎成纖維細(xì)胞(HF),進(jìn)行病毒分離;對分離得到的病毒株應(yīng)用間接免疫熒光法鑒定后,擴(kuò)增病毒并提取VZV臨床分離株與v-Oka株的基因組DNA。經(jīng)過PCR擴(kuò)增VZV開放讀碼框(ORF)1、21、22、38、54、62和R5可變區(qū)的部分片段,通過RFLP對ORF38、54和62的PstI、BglI和SmaI酶切位點(diǎn)的突變情況進(jìn)行分析,通過比較PCR產(chǎn)物長度分析R5可變區(qū)重復(fù)單位的拷貝數(shù),同時(shí)對ORF1、21、22和54的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序,分析其中一些特定SNP位點(diǎn)的突變情況,從而確定其基因型別。 從醫(yī)院檢驗(yàn)科保存的3557份體檢者血清中隨機(jī)抽取592份血清,采用以VZV感染細(xì)胞作為抗原、異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的羊抗人IgG作為二抗的FAMA試驗(yàn)檢測血清中特異性VZV抗體,進(jìn)行VZV的流行病學(xué)調(diào)查。 結(jié)果:從臨床采集的36份標(biāo)本中分離鑒定后得到19例VZV臨床分離株,病毒分離陽性率為52.8%。RFLP分析結(jié)果顯示,19例臨床分離株的酶切位點(diǎn)特征均為PstI+ BglI+ SmaI-,而v-Oka株為PstI- BglI+ SmaI+;R5可變區(qū)PCR結(jié)果出現(xiàn)359bp(R5A)和471bp(R5B)兩種結(jié)果, R5A有9例(47.4%),R5B有10例(52.6%);對ORF1, 21, 22, 54的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序分析發(fā)現(xiàn)19例臨床分離株均歸屬為基因型J1,不同于v-Oka株所歸屬的基因型J2,進(jìn)一步分析還發(fā)現(xiàn)19例臨床分離株中有4例(21%)在ORF1中核苷酸780～781位點(diǎn)之間插入了3個(gè)核苷酸CGG,它們編碼一個(gè)脯氨酸;另外,在其中的2株臨床分離株中還發(fā)現(xiàn)了3個(gè)不同的突變位點(diǎn)分別為ORF21 (SNP 33608) CT、ORF54 (SNP 95150) TG、ORF22 (SNP 38055) CA。 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)表明用FAMA試驗(yàn)檢測VZV抗體,與其他的皰疹類病毒的相應(yīng)抗體不產(chǎn)生交叉反應(yīng),具有高度特異性。應(yīng)用此法檢測592份血清標(biāo)本中,VZV抗體總體陽性率為76.52%;1~3歲、4~6歲、7~13歲、14~19歲、20~29歲、30~39歲、40~49歲及50歲各年齡組的血清抗體陽性率分別是14.67%,51.56%,73.91%,91.26%,92.78%,95.65%,98.11%和100%。1~3歲年齡組血清抗體陽性率最低,血清抗體陽性率隨年齡的增大而升高。不同性別間陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.005),不同年齡組間陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。 結(jié)論:水痘或帶狀皰疹患者皮膚水皰液中VZV病毒顆粒含量較多,標(biāo)本接種在人胚成纖維細(xì)胞上3~7d可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE),病毒分離陽性率為52.8%。RFLP分析結(jié)果顯示19例臨床分離株均為PstI+ BglI+ SmaI-,國外已有研究表明具有這種酶切特征的毒株多出現(xiàn)在歐洲和北美,亞洲較為少見,該酶切特征與v-Oka株的酶切特征PstI- BglI+SmaI+不同,說明本實(shí)驗(yàn)中所分離到的VZV臨床分離株并不是v-Oka株。DNA測序分析結(jié)果顯示所有19例毒株均屬于J1型,與歐洲、美國、日本的VZV毒株基因型不相同,與v-Oka株的基因型(J2型)也不同,說明本實(shí)驗(yàn)中獲得的VZV臨床分離株并不是v-Oka株,疾病不是由v-Oka株引起的。 血清學(xué)研究表明,FAMA法檢測人群中VZV抗體與其他的皰疹類病毒的相應(yīng)抗體不產(chǎn)生交叉反應(yīng),是VZV抗體檢測的可靠方法。VZV感染主要發(fā)生在兒童時(shí)期,因此預(yù)防水痘感染和流行,應(yīng)以1～3歲兒童為VZV疫苗免疫的首選對象,3歲以上者宜選擇沒有水痘史的兒童作為免疫對象。
【關(guān)鍵詞】：水痘-帶狀皰疹病毒 基因分型 v-Oka株 臨床分離株 膜抗原熒光抗體試驗(yàn) 血清抗體陽性率
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R752.12;R181.3
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 第一部分 水痘-帶狀皰疹病毒臨床分離株基因型別分析及其與 Oka 疫苗株的區(qū)別12-35
• 1.1 引言12-18
• 1.1.1 VZV 的生物學(xué)特性及所致疾病12-13
• 1.1.2 VZV 的基因組結(jié)構(gòu)13
• 1.1.3 VZV 基因組變異13-15
• 1.1.4 VZV 基因分型15-17
• 1.1.5 VZV 感染的預(yù)防17-18
• 1.2 材料和方法18-23
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)方案18-19
• 1.2.2 材料與試劑19-21
• 1.2.3 方法21-23
• 1.3 結(jié)果23-29
• 1.3.1 病毒分離結(jié)果23-24
• 1.3.2 病毒鑒定結(jié)果24
• 1.3.3 ORF38 的限制性片段長度多態(tài)性分析結(jié)果24-25
• 1.3.4 ORF54 的限制性片段長度多態(tài)性分析結(jié)果25-26
• 1.3.5 ORF62 的限制性片段長度多態(tài)性分析26-27
• 1.3.6 R5 可變區(qū)分析27
• 1.3.7 序列分析結(jié)果27-29
• 1.4 討論29-33
• 1.4.1 VZV 病毒分離29-30
• 1.4.2 VZV 臨床分離株基因型別分析30-31
• 1.4.3 VZV 臨床分離株與Oka 疫苗株的區(qū)別31-33
• 1.4.4 VZV 基因分型與 Oka 疫苗株區(qū)別的意義33
• 1.4.5 本研究不足之處及下一步研究目標(biāo)33
• 1.5 結(jié)論33-35
• 第二部分 應(yīng)用膜抗原熒光抗體試驗(yàn)對 VZV 進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查35-45
• 2.1 引言35-36
• 2.2 材料和方法36-38
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)方案36
• 2.2.2 材料與試劑36-37
• 2.2.3 方法37-38
• 2.3 結(jié)果38-40
• 2.3.1 FAMA 試驗(yàn)結(jié)果觀察與判定38-39
• 2.3.2 不同年齡組人群血清中 VZV 抗體陽性率39-40
• 2.4 討論40-44
• 2.5 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 附錄一：簡歷53-54
• 附錄二：致謝54-55
• 附錄三：綜述55-66

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本文編號(hào)：301443