【摘要】： 志賀菌屬(shigellae)細(xì)菌是胃腸道感染主要病原菌之一，傳染源主要為病人和帶菌者，通過污染了痢疾桿菌的食物、飲水等經(jīng)口感染。世界范圍內(nèi)每年發(fā)病人數(shù)約為1.647億，死亡約110.6萬，其中69％為5歲以下的兒童。在我國引起了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，不僅為散發(fā)性腹瀉的主要病原之一，也經(jīng)常引起食物中毒暴發(fā)。許多研究發(fā)現(xiàn)，近些年臨床上分離的志賀菌對以往臨床常用的抗生素逐漸耐藥，有的菌株甚至多重耐藥。以往的一線藥物被超廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素所取代，作為90年代以后治療志賀菌感染的經(jīng)驗性用藥。然而，1999年Ahamed等在印度首次發(fā)現(xiàn)了志賀菌中存在SHV-11型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)以來，世界各地均有志賀菌中ESBL的報道，并且有逐步增加的趨勢。志賀菌對超廣譜β-內(nèi)酰胺類藥物的耐受，給臨床治療帶來新的問題。而且，這些酶的耐藥基因往往編碼在質(zhì)粒上，使這些耐藥基因可在同種甚至不同種的細(xì)菌之間傳播，極易造成醫(yī)院感染的暴發(fā)流行，是臨床防治非常棘手的問題。 本研究收集了蕭山婦幼保健醫(yī)院、紹興市人民醫(yī)院和杭州市疾病預(yù)防控制中心2006年8月到12月臨床分離的志賀菌42株。細(xì)菌經(jīng)全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)鑒定，采用瓊脂稀釋法測定42株細(xì)菌對12種抗菌藥物的最低抑菌濃度；接合試驗分析耐藥基因是否位于可接合質(zhì)粒上；采用等電聚焦電泳(Isoelectric Focusing Electrophoresis IEF)測定臨床分離的菌株及接合子β-內(nèi)酰胺酶等電點；設(shè)計包括SHV-1、TEM-1、CTX-M-1組、CTX-M-2組、CTX-M-8組和CTX-M-9組的特異引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增臨床分離菌株及其相應(yīng)接合子的耐藥基因，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，確定β-內(nèi)酰胺酶基因型。采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)進(jìn)行分子生物學(xué)分型，用抗血清對志賀菌進(jìn)行血清學(xué)分型。 藥敏試驗結(jié)果顯示42株志賀菌對碳青霉烯類和喹諾酮類抗生素的敏感率分別為100％和95.2％。對氨曲南、超廣譜β-內(nèi)酰胺類和含酶抑制劑的抗生素敏感性次之。對慶大霉素和氨芐西林的耐藥率最高，分別為90.5％和80.5％。11株志賀菌檢測到具有ESBL，并且都能夠接合，接合子耐藥譜與原始菌相似。等電聚焦電泳結(jié)果顯示接合子均有一條等電點條帶，為9.0或7.9。PCR擴(kuò)增和測序證實等電點為9.0和7.9的β-內(nèi)酰胺酶分別為CTX-M-15和CTX-M-14。福氏志賀菌中檢測到Fla、F2a、F2b、Fx、F4和F4c六種血清型。42株志賀菌中來自蕭山婦幼保健醫(yī)院的11株福氏志賀菌及紹興市人民醫(yī)院的13株宋內(nèi)志賀菌的PFGE條帶及位置分別一致。 以上研究表明，26.2％(11／42)的菌株攜帶可接合的ESBL的耐藥基因，包括CTX-M-15和CTX-M-14。F4型福氏志賀菌，在蕭山地區(qū)優(yōu)勢流行，來自蕭山婦幼保健醫(yī)院的福氏志賀菌及紹興市人民醫(yī)院的宋內(nèi)志賀菌分別來源于同一類型菌株。
【圖文】：

圖3接合菌質(zhì)粒電泳圖宋內(nèi)志賀菌:12，13，14，15，16，17，20，邪福氏志賀菌:42，l，日標(biāo)準(zhǔn)分子量質(zhì)粒菌株VS17分子量:54.2，7.3，5.6，5.2，3.9，3.0，竺.了，，2.1肋6.2PCR檢測結(jié)果尸C尺篩選11株原始菌及其接合子超廣譜日一內(nèi)酸胺酶基因，包括T巨M一組、SllV-組、CTX一勸一l組、CTX一M一三組、C下X一功一8組和CTX一M一9組。尸CR陽性擴(kuò)增結(jié)果有CTX一M--l組和CTX一M一9組，分別為5株原始菌及其接合子和6株原始菌及其接合子。它們的長度分別為944bp和877匕p(圖4，5)。

原始菌及其接合子CTX一M一l組巨SBL擴(kuò)增結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R181.3;R450

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本文編號：2563539