【摘要】： 目的: 建立HPeV的實驗室檢測方法,在住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中開展HPeV的檢測工作,初步掌握HPeV在蘭州地區(qū)住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中的流行特征;探討不同HPeV基因型與急性胃腸炎之間的關系,為進一步揭示和闡明嬰幼兒重癥腹瀉的病因構成及HPeV的病原學特點奠定基礎。 方法: 研究對象選自2006年7月至2007年6月間,蘭州大學第一醫(yī)院兒科因重癥腹瀉而住院的286名5歲以下兒童作為病例組;以及蘭州大學第一醫(yī)院兒童體檢中心同期進行例行體檢的98名無臨床癥狀的5歲以下兒童作為對照組,進行病例對照研究。蘭州大學第一醫(yī)院兒科負責收集每位研究對象的糞便標本并填寫相關標本采集表后低溫運送至中國CDC病毒所。糞便標本經提取核酸后通過Real-time RT-PCR檢測HPeV。從中選取一例HPeV陽性標本的Real-time RT-PCR產物經體外轉錄成RNA標準品,用以對HPeV核酸濃度進行定量。使用基于VP3/VP1基因連接區(qū)的兩對引物進行巢式RT-PCR擴增,通過對擴增產物進行測序分型。使用MEGA3.1序列分析軟件對測序結果進行基因序列分析和繪制系統(tǒng)進化樹;采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件對研究結果和臨床資料進行統(tǒng)計分析。 結果: 在本研究中,共檢出HPeV陽性標本99例,其中病例組檢出84例,檢出率為29.4%(84/286);對照組檢出15例,檢出率為15.3%(15/98)。在病例組84例HPeV陽性標本中,HPeV1共發(fā)現(xiàn)43例,占51.2%,其余分別為HPeV3,25例(29.8%),HPeV4,4例(4.8%), HPeV6,2例(2.4%),HPeV8,1例(1.2%),未分型標本,9例(10.7%);在對照組15例HPeV陽性標本中,HPeV1共發(fā)現(xiàn)8例,占53.3%,其余分別為HPeV3,3例(20.0%),HPeV4,3例(20.0%),HPeV5,1例(6.7%)。HPeV2和HPeV7均未檢測到。HPeV1感染好發(fā)于秋冬季節(jié),HPeV3感染好發(fā)于秋季;與HPeV1和HPeV3感染患兒年齡相比,HPeV4感染患兒年齡較小。病例組中71.4%(60/84)的HPeV感染患兒為混合感染,對照組中HPeV感染患兒混合感染率為13.3%(2/15),二者差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),輪狀病毒和人杯狀病毒為最常見的混合感染病毒。病毒載量最高的兩份HPeV陽性標本均為對照組兒童,病例組和對照組間HPeV1、3、4基因型病毒載量差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。VP3/VP1基因進化分析發(fā)現(xiàn),有一份毒株(No.49330)無法被分型,它與相臨參考株的氨基酸同源性分別為89.41%和67.44%。對不同組間臨床癥狀比較發(fā)現(xiàn),差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),HPeV1和HPeV3感染并不能加重腹瀉患兒的臨床癥狀。 結論: HPeV在蘭州地區(qū)腹瀉住院患兒和無癥狀兒童糞便標本中的檢出率均較高,且有多種基因型在流行。研究結果提示,HPeV1和HPeV3可能并不是5歲以下兒童胃腸炎的致病原。因此,推測HPeV1和HPeV3可能是胃腸道(gastrointestinal,GI)中的機會性致病原,當機體感染其他病毒時才被激活而致病。
【圖文】：

得一份 HPeV 陽性標本 Real-time RT-PCR 為 marker；第 1 泳道 Real-time RT-PCR 擴增產鑒定和基因測序：：取 1.5mlEP 管，加入 1ul pGEM連接酶 1ul，，3ul 純化 DNA，混勻，：取 33ul DH5α 感受態(tài)細胞加入連鐘，將 EP 管放入 42℃水浴熱激 90 秒4 分鐘，每管加入 60ulLB 培養(yǎng)液體基布于已涂布 IPTG（8ul）和 X-gal（4脂平板上，將平板置于室溫至液體和提取及鑒定：從藍白斑篩選平板l氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃劇Plasmid Mini Kit 試劑盒提取質粒,方

質粒的酶切鑒定電泳圖
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R181.3

【共引文獻】

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本文編號：2530780