【摘要】： 目的 將糞腸球菌法和芽孢法兩種模擬污染物實驗室評價方法,運用于管腔型器械清洗效果評價,比較二者的一致性、重復性和穩(wěn)定性;建立體外生物膜生成模型,將細菌生物膜引入實驗室清洗效果評價,為制定我國管腔型器械清洗效果評價方法提供實驗參考和數據支持。 方法 1.用糞腸球菌法和芽孢法,評價清洗液和水的清洗效果,通過比較除菌對數值(RF)、變異系數(CV)和95%可信區(qū)間(95%CI),分析兩種方法用于清洗效果評價時的重復性和穩(wěn)定性。 2.根據肉眼觀察4種標準菌株培養(yǎng)24h后細胞板中膜狀物生成情況,選擇生物膜培養(yǎng)用菌;用普通光學顯微鏡(OM)、菌落計數法,確定成熟生物膜培養(yǎng)時間。根據試驗結果建立培養(yǎng)模型:含銅綠假單胞菌的肉湯培養(yǎng)基于測試管(Teflon、PVC)內以10mL/min流速每日持續(xù)流動4h,連續(xù)培養(yǎng)6天后,形成成熟生物膜。 3.分別用兩種清洗方式(清洗液、水)和兩種清洗消毒方式(清洗液+OPA、水+OPA)處理附著有成熟生物膜的測試管(Teflon、PVC),利用普通光學顯微鏡(OM)、掃描電子顯微鏡(SEM)和菌落計數法,定性定量評價以上四種方法處理生物膜的效果。 4.用載體定量殺菌試驗和肉湯培養(yǎng)法,對比分析0.55%鄰苯二甲醛作用于浮游細菌和生物膜細菌的區(qū)別。 結果 1.評價清洗液清洗效果,糞腸球菌法RF為4.07,芽孢法RF為4.83,二者差異有統計學意義(p＜0.05);評價水清洗效果,糞腸球菌法和芽孢法RF分別為2.57、2.22,且差異無統計學意義(p＞0.05)。在評價清洗液清洗效果時,糞腸球菌法CV為0.247,95%CI(3.64,4.49),芽孢法為CV 0.117,95%CI(4.58,5.07);評價水清洗效果時,糞腸球菌法CV為0.334,95%CI(2.24,2.91),芽孢法CV為0.299,95%CI(1.94,2.47)。 2.培養(yǎng)6天后銅綠假單胞菌生物膜管壁粘附穩(wěn)定性好,細菌濃度達10~7cfu/cm~2,結晶紫染色OM觀察可見,生物膜厚度均勻,且不易被成片沖脫。 3.清洗效果評價中,“水洗”和“清洗液清洗”處理附著生物膜的Teflon測試管殘留菌落平均對數值分別為6.16和6.32,差異無統計學意義(p＞0.05);清洗消毒效果評價中,殘留菌落平均對數值分別為0.77和0.59,二者差異無統計學意義(p＞0.05)。SEM觀察可見“清洗液清洗”組殘細菌胞外基質較少;“水+OPA”組殘留生物膜細菌多于“清洗液+OPA”組。SEM觀察結果和菌落計數結果不一致。PVC管生物膜處理結果與Teflon管類似。 4.附著浮游銅綠假單胞菌測試管,于0.55%OPA浸泡1min,細菌殺滅率達100%;附著銅綠假單胞菌生物膜測試管,于0.55%OPA浸泡7min,仍有53.8%(14/26)測試管上可回收活菌(10cfu/管～60cfu/管),另將活菌檢測呈陰性的測試管置入營養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)24h后,25%(3/12)試管肉湯呈渾濁狀。 結論 1.糞腸球菌法和芽孢法評價管腔清洗效果結果并不完全一致。芽孢法的穩(wěn)定性較糞腸球菌法好,且用于清洗效果評價同樣具有代表性,但染菌濃度需增加,測試管長度代表性還需進一步實驗證實。 2.培養(yǎng)6天的銅綠假單胞菌生物膜在測試管內分布均勻,不易被成片沖脫,可用于清洗效果評價。 3.清洗液去除細菌胞外基質效果優(yōu)于水;清洗消毒處理后,殘留的生物膜細菌多為無活性死菌;相比水洗處理,清洗液處理更有利于后續(xù)消毒程序進一步去除細菌生物膜。 4.銅綠假單胞生物膜細菌比浮游菌對消毒劑(0.55%OPA)具有更強的耐受性。
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【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R187

【參考文獻】

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本文編號：2355179