本文關(guān)鍵詞：淡色庫蚊核糖體蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京醫(yī)科大學》 2007年

淡色庫蚊核糖體蛋白S4基因克隆及其在溴氰菊酯抗性作用中的初步研究

王衛(wèi)杰  

【摘要】： 【目的】克隆淡色庫蚊核糖體蛋白S4(RPS4)基因的全長序列，并研究其與蚊抗藥性的相關(guān)性。 【方法】根據(jù)本試驗室抑制性差減雜交結(jié)合cDNA芯片篩選獲得的EST片段(GenBank accession no．BE247804)設(shè)計引物，分別與載體序列配對，通過PCR的方法，從淡色庫蚊抗性品系中分別擴增出目的基因的5′和3′末端，分別T／A克隆于pGT載體，轉(zhuǎn)化、測序、對位拼接獲取全長序列。用Clustal X、Clustal W等生物信息學軟件對編碼的氨基酸序列進行分析。用實時熒光定量PCR驗證RPS4基因在淡色庫蚊抗性、敏感品系不同發(fā)育階段中的差異表達。應用基因重組方法構(gòu)建RPS4基因的原核和昆蟲表達載體；將重組的昆蟲表達載體轉(zhuǎn)入蚊C6／36細胞，經(jīng)藥物篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系，RT-PCR鑒定目的基因表達；用~3H-TdR摻入法檢測穩(wěn)定表達的單克隆細胞對溴氰菊酯的敏感性。 【結(jié)果】獲得淡色庫蚊RPS4基因的全長cDNA序列，總長度為1002 bp，，開放閱讀框為789 bp，編碼262個氨基酸(GenBank accessionno．DQ647667)。淡色庫蚊RPS4與埃及伊蚊、岡比亞按蚊、果蠅的RPS4同源性分別為96％、91％、78％。熒光定量PCR結(jié)果顯示，RPS4基因在淡色庫蚊抗性和敏感品系的不同發(fā)育階段均有表達；在蛹和成蟲發(fā)育階段，與敏感品系相比，RPS4基因在抗性品系中高表達(P＜0.01)。成功構(gòu)建了RPS4基因的原核和昆蟲表達載體。~3H-TdR摻入法結(jié)果顯示，在一定濃度的溴氰菊酯處理下，轉(zhuǎn)染RPS4基因的細胞存活率與對照組相比，無顯著性差異(P＞0.05)。 【結(jié)論】本研究獲得了淡色庫蚊RPS4基因的全長cDNA序列。該基因在淡色庫蚊溴氰菊酯抗性品系中(蛹和成蟲期)高表達，提示該基因與淡色庫蚊溴氰菊酯抗性相關(guān)，但其在細胞對抗溴氰菊酯的毒性作用中未發(fā)現(xiàn)有保護作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R346;R184
【目錄】：

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