本文關(guān)鍵詞：淡色庫蚊arrestin基因克隆及其在抗藥性中作用的初步研究

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【摘要】：淡色庫蚊（Culex pipiens pallens）是我國重要的家棲性傳病媒介，嚴(yán)重危害人類健康�；瘜W(xué)防制是控制蚊媒的有效手段。隨著殺蟲劑的長期大量使用，蚊媒對殺蟲劑的抗性隨之發(fā)生發(fā)展。鑒定新的抗藥性基因并研究其如何參與抗藥性機制，已成為媒介抗藥性領(lǐng)域新的研究熱點。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)并證明，視蛋白基因(opsin)為蚊抗藥性相關(guān)基因。在進一步研究其抗性機制中發(fā)現(xiàn)，arrestin可能也參與蚊對溴氰菊酯抗性，另有文獻報道，在致倦庫蚊抗氯菊酯品系和果蠅抗DDT品系中，其arrestin較敏感品系高表達。 在此基礎(chǔ)上，本課題通過PCR方法，從淡色庫蚊抗性品系中擴增arrestin基因的ORF序列，并采用RACE法擴增其5'和3'末端，對位拼接獲取全長序列；通過實時熒光定量PCR分析arrestin在淡色庫蚊敏感品系和抗性品系各發(fā)育階段中的表達；隨后，在蚊細胞水平先后通過轉(zhuǎn)染高表達和RNAi低表達的方法，用CCK8方法檢測arrestin對蚊細胞溴氰菊酯敏感性的影響，同時通過過熒光實時定量PCR檢測蚊抗藥性基因CYP6A1和opsin的表達水平。 本研究獲得了淡色庫蚊arrestin基因的全長cDNA序列，編碼384個氨基酸（GenBank ID: HQ833831,2011）。其推導(dǎo)的氨基酸序列與致倦庫蚊、岡比亞按蚊、黑腹果蠅的arrestin同源性分別為99％、92％、71％。熒光定量PCR結(jié)果顯示，arrestin基因在淡色庫蚊抗性和敏感品系的不同發(fā)育階段均有表達，其中在卵、蛹和成蟲階段，抗性品系中較敏感品系高表達（p0.05）。蚊細胞高表達arrestin后，細胞對溴氰菊酯的敏感性降低，CYP6A1和opsin的表達增高；蚊細胞低表達arrestin（siRNA介導(dǎo)的arrestin基因沉默）后，細胞對溴氰菊酯的敏感性增加，CYP6A1和opsin的表達降低。以上結(jié)果表明，arrestin為一新的蚊抗藥性基因，， arrestin可能通過與視蛋白一起作用，改變與擬除蟲菊酯抗性相關(guān)的細胞色素P450的表達，參與蚊對溴氰菊酯的抗性。 本研究首次報告蚊arrestin為一新的抗藥性基因，并初步探討了arrestin參與抗藥性的機制。本研究結(jié)果為進一步闡明抗藥性的分子機制，建立抗藥性的檢測方法和治理抗藥性提供了新的科學(xué)依據(jù)，具有重要的理論意義和潛在的實際應(yīng)用價值。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R184

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本文編號：1160601