本文關(guān)鍵詞：上海一株豬源隱孢子蟲(chóng)的蟲(chóng)種鑒定及遵義市人畜隱孢子蟲(chóng)感染的初步調(diào)查

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【摘要】：目的：1、選擇一種高效、簡(jiǎn)潔快速、價(jià)格合理的糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一株豬源隱孢子蟲(chóng)的蟲(chóng)種鑒定。3、初步了解遵義部分腹瀉兒童、腫瘤病人及家畜的隱孢子蟲(chóng)感染情況及其流行特征。 方法：1、用三種不同的試劑盒提取糞便DNA,通過(guò)比較所提取DNA的濃度、純度、提取率及巢式PCR產(chǎn)物等評(píng)價(jià)三種糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一份豬糞樣品經(jīng)改良-抗酸染色確定隱孢子蟲(chóng)感染,測(cè)量卵囊大��；提取DNA后經(jīng)18SrRNA基因巢式PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后用Blast和MEGA軟件進(jìn)行同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析。3、采集遵義醫(yī)學(xué)院附院兒科腹瀉患者及腫瘤科病人、周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)狗、牛、豬糞便標(biāo)本共582份,改良抗酸染色檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)卵囊,所有樣本提取DNA后經(jīng)18SrRNA基因巢式PCR擴(kuò)增。 結(jié)果：1、Genmed試劑盒提取的DNA濃度最高、PCR產(chǎn)物條帶最亮,但提取時(shí)間相對(duì)過(guò)長(zhǎng),價(jià)格相對(duì)過(guò)高。天根試劑盒提取的DNA純度最高,DNA濃度及價(jià)格適中,提取時(shí)間最短。碧云天試劑盒提取的DNA純度、濃度均不高且提取時(shí)間最長(zhǎng),但價(jià)格最便宜。2、上海豬糞樣品經(jīng)改良-抗酸染色后卵囊呈玫瑰紅色、圓形,其大小為(4.90±0.83)μm X (4.52±0.73)μm;通過(guò)18SrRNA基因分析,上海豬源隱孢子蟲(chóng)與巴西一株隱孢子蟲(chóng)豬基因型Ⅱ(Cryptosporidium sp. pig genotypeⅡ)同源性為100%,種系發(fā)育樹(shù)上兩者在同一分支。3、遵義采集的所有人畜糞便標(biāo)本經(jīng)改良抗酸染色,顯微鏡觀察均未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲(chóng)卵囊；所有樣本提取DNA經(jīng)18SrRNA巢式PCR均未擴(kuò)增出特異性片段。 結(jié)論：1、Genmed試劑盒提取糞便微量DNA最靈敏；天根試劑盒提取DNA適于純度要求較高的分子生物學(xué)研究。2、上海豬源隱孢子蟲(chóng)鑒定為隱孢子蟲(chóng)豬基因型Ⅱ{Cryptosporidium sp. pig genotypeⅡ)，，3、通過(guò)對(duì)遵義地區(qū)部分腹瀉兒童、腫瘤病人及家畜糞便進(jìn)行檢查,尚未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲(chóng)感染。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R181.3;S855.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1147219