本文關(guān)鍵詞：ATP生物熒光法對(duì)消毒效果快速評(píng)價(jià)方法研究

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【摘要】：1.目的研究ATP(三磷酸腺苷)生物熒光法和菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)不同濃度的6種病原微生物方法之間的相關(guān)性；觀察ATP生物熒光檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)細(xì)菌的穩(wěn)定性和重復(fù)性,以及不同消毒劑對(duì)其影響；ATP生物熒光檢測(cè)技術(shù)在現(xiàn)場(chǎng)清潔和消毒效果評(píng)價(jià)的應(yīng)用情況,為制定以ATP生物熒光檢測(cè)技術(shù)為代表的消毒效果快速評(píng)估技術(shù)提供實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)支持。2.方法2.1通過(guò)ATP生物熒光檢測(cè)系統(tǒng)與其配套的試劑盒對(duì)細(xì)菌懸液進(jìn)行定量檢測(cè)6種代表性微生物大腸桿菌(腸道感染菌),金黃色葡萄球菌(化膿性菌),銅綠假單胞菌(院內(nèi)感染菌),白色念珠菌(致病性真菌),龜分枝桿菌膿腫亞種(結(jié)核分枝桿菌)、枯草桿菌黑色變種芽孢(芽孢),與菌落計(jì)數(shù)法平行比較,通過(guò)統(tǒng)計(jì)圖描述兩種方法的線性關(guān)系。2.2選用ATP生物熒光檢測(cè)法連續(xù)三天重復(fù)測(cè)定同一份經(jīng)過(guò)菌落計(jì)數(shù)的(1×101cfu/ml-1×106cfu/ml)標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌(ATCC8099);重復(fù)三天測(cè)定同一份經(jīng)過(guò)菌落計(jì)數(shù)的(1×105cfu/ml)標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌(ATCC8099)的ATP含量值,通過(guò)重復(fù)測(cè)量的單因素方差分析法對(duì)相關(guān)性進(jìn)行球形檢驗(yàn),并采用Geehouse-Geisser和Huynh-Feldt校正檢驗(yàn),檢驗(yàn)ATP法的穩(wěn)定性。2.3通過(guò)消毒中和劑選擇實(shí)驗(yàn)和細(xì)菌懸液定量殺滅實(shí)驗(yàn),篩選出符合本次實(shí)驗(yàn)用的三種消毒劑(0.05%次氯酸鈉、0.55%鄰苯二甲醛、70%乙醇)的中和劑和消毒劑效果。2.4選取大腸桿菌(ATCC8099)和ATP標(biāo)準(zhǔn)品在三種消毒劑不同時(shí)間作用后,通過(guò)ATP法檢測(cè)驗(yàn)證消毒劑對(duì)其影響程度。2.5使用檢測(cè)靈敏度為1×10-15mole ATP的檢測(cè)儀器和專用采樣棒比對(duì)菌落計(jì)數(shù)法評(píng)價(jià)醫(yī)院Ⅲ類區(qū)域普通住院病區(qū)經(jīng)過(guò)不同清潔方式作用后環(huán)境物體表面清潔度；使用ATP檢測(cè)靈敏度是1×10-18mole ATP臺(tái)式檢測(cè)儀比對(duì)菌落計(jì)數(shù)法評(píng)價(jià)醫(yī)院Ⅲ類區(qū)域普通住院病區(qū)后環(huán)境物體表面消毒效果,非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.6使用ATP檢測(cè)靈敏度是1×10-18mole ATP臺(tái)式檢測(cè)儀比對(duì)菌落計(jì)數(shù)法評(píng)價(jià)5處經(jīng)過(guò)高水平消毒劑作用的場(chǎng)所外環(huán)境消毒效果,都以消毒前后下降率90%為合格標(biāo)準(zhǔn),通過(guò)配對(duì)卡方檢驗(yàn)進(jìn)行結(jié)果分析。3.結(jié)果3.1ATP法與菌落計(jì)數(shù)法在六種菌懸液方法比對(duì)結(jié)果菌落計(jì)數(shù)為1.0×101-1.0×106 cfu/ml的銅綠假單胞菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌在不同細(xì)菌濃度值與ATP檢測(cè)值相比,對(duì)數(shù)值之間分別存在線性關(guān)系,大腸桿菌回歸方程為回歸方程為(Y=0.831X+0.3239,R2=0.9261)；金黃色葡萄球菌回歸方程為(Y=0.9983 X-0.0633,R2=0.9913)；銅綠假單胞菌回歸方程為(回歸方程為Y=0.8736X-0.0741,R2=0.9778)；在細(xì)菌懸液菌落計(jì)數(shù)為1.0×101-1.0×105 cfu/ml范圍內(nèi)白色念珠菌菌懸液菌值與ATP對(duì)數(shù)值之間呈線性關(guān)系(Y=1.4867X-2.707,R2=0.926)；在細(xì)菌懸液菌落計(jì)數(shù)為1.0×102-1.0×107 cfu/ml范圍內(nèi)龜分枝桿菌菌懸液菌值與ATP值之間呈線性關(guān)系(Y=0.9639X+2.0683,R2=0.979)；在芽孢懸液菌落計(jì)數(shù)為1.0×102-1.0×105 cfu/ml范圍內(nèi)芽孢懸液值與ATP對(duì)數(shù)值之間呈線性關(guān)系(Y=1.9897X-0.9677,R2=0.9211)。3.2ATP方法檢測(cè)大腸桿菌穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果三天內(nèi)重復(fù)測(cè)量同一份不同濃度大腸桿菌ATP值,線圖變化顯示結(jié)果值趨于一致,ATP法穩(wěn)定性比較高；同一份濃度為1×105cfu/m1的大腸桿菌標(biāo)本進(jìn)行10次ATP測(cè)定結(jié)果通過(guò)單因素重復(fù)測(cè)量資料的方差分析：球形檢驗(yàn)結(jié)果P=0.896(0.05),Geehouse-Geisser校正后F=0.111P=0.895(0.05),Huynh-Feldt校正后F=0.111P=0.896(0.05)。3.3實(shí)驗(yàn)用的消毒劑中和劑選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果懸液定量殺菌試驗(yàn)顯示經(jīng)過(guò)0.05%次氯酸鈉、0.55%的鄰苯二甲醛、70%的乙醇消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘后隨著消毒劑作用時(shí)間的延長(zhǎng),大腸桿菌殘留的菌懸液值與ATP值作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),菌落計(jì)數(shù)值與ATP對(duì)數(shù)值之間呈線性關(guān)系,經(jīng)過(guò)中和劑可及時(shí)阻斷消毒劑繼續(xù)作用,不影響檢測(cè)試劑的作用。3.4實(shí)驗(yàn)用的消毒劑對(duì)ATP標(biāo)準(zhǔn)品的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果ATP檢測(cè)試劑的標(biāo)準(zhǔn)品做對(duì)照檢測(cè)值對(duì)數(shù)值為5.95；0.05%次氯酸鈉的消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對(duì)數(shù)值分別為5.72、5.32、5.26、5.24、5.18；含0.55%的鄰苯二甲醛的消毒液作用作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對(duì)數(shù)值分為5.65、5.61、5.53、5.57、5.48；含70%的乙醇的消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對(duì)數(shù)值分別為5.71、5.77、5.60、5.64、5.61,隨著標(biāo)準(zhǔn)品與消毒劑作用時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)數(shù)值略有下降。3.5不同檢測(cè)靈敏度ATP檢測(cè)儀與菌落計(jì)數(shù)法評(píng)價(jià)醫(yī)療機(jī)構(gòu)物體表面清潔度和消毒效果比對(duì)結(jié)果不同評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)兩種清潔方式顯示經(jīng)過(guò)普通棉布加自來(lái)水清潔后結(jié)果檢出率要高于含0.3%復(fù)合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾清潔方式,表明評(píng)價(jià)一致性較高。40份使用ATP手持機(jī)檢測(cè)經(jīng)過(guò)普通棉布加自來(lái)水清潔方式的結(jié)果Md值與IQR值為215RLU/100cm2和372RLU/100cm2,40份使用ATP手持機(jī)檢測(cè)經(jīng)過(guò)含0.3%復(fù)合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾為清潔方式的Md值與IQR值分別為27RLU/100cm2和76RLU/100cm2;40份使用菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)經(jīng)過(guò)普通棉布加自來(lái)水清潔方式的結(jié)果Md值與IQR值38cfu/cm2、117cfu/cm2,40份使用菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)經(jīng)過(guò)含0.3%復(fù)合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾為清潔方式的Md值與IQR值分別為14 cfu/cm2、71cfu/cm2。20份經(jīng)過(guò)含氯消毒劑作用前后的ATP下降值的Md值與IQR值分別為170.5(2amole/cm2)和233.75(2amole/cm2),菌落計(jì)數(shù)下降值的的Md值與IQR值分別為140cfu/cm2、102 cfu/cm2,P=0.137(0.05).3.6 ATP高靈敏度檢測(cè)儀在評(píng)價(jià)現(xiàn)場(chǎng)外環(huán)境消毒效果的結(jié)果5處不同場(chǎng)所各15份樣本消毒前和消毒后,菌落計(jì)數(shù)法和ATP法合格率通過(guò)配對(duì)卡方檢驗(yàn)顯示P0.05(P=0.070)。4.結(jié)論在一定濃度范圍內(nèi)菌落計(jì)數(shù)法與ATP法很高的相關(guān)性；ATP法檢測(cè)細(xì)菌的含量穩(wěn)定性較高；使用中和劑作為采樣液不影響ATP檢測(cè)效果；消毒劑ATP試劑標(biāo)準(zhǔn)品的無(wú)影響；ATP檢測(cè)技術(shù)雖然作為一種快速檢測(cè)方法,但是對(duì)于不同的檢測(cè)目的(清潔效果、消毒效果)需要正確選擇不同靈敏度的檢測(cè)儀器才能達(dá)到預(yù)期效果。
【關(guān)鍵詞】：三磷酸腺苷 消毒劑 效果 影響因素
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R187
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-14
• 第一部分 前言14-16
• 第二部分 研究?jī)?nèi)容16-40
• 一 菌落計(jì)數(shù)法與ATP生物熒光法檢測(cè)細(xì)菌方法比較16-28
• 1.1 材料和方法16-17
• 1.2 結(jié)果17-25
• 1.3 討論25-27
• 1.4 小結(jié)27-28
• 二 消毒劑使用對(duì)ATP生物熒光檢測(cè)法影響研究28-32
• 2.1 材料和方法28
• 2.2 結(jié)果28-30
• 2.3 討論30-31
• 2.4 小結(jié)31-32
• 三 ATP生物熒光技術(shù)現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)清潔消毒效果研究32-40
• 3.1 材料和方法32-34
• 3.2 結(jié)果34-37
• 3.3 討論37-39
• 3.4 小結(jié)39-40
• 第三部分 本研究?jī)?yōu)點(diǎn)與局限性40-41
• 第四部分 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附錄46-48
• 綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果57

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本文編號(hào)：1102795