本文關(guān)鍵詞：Smad3與C-jun調(diào)控成釉細(xì)胞Mmp20基因轉(zhuǎn)錄活性的研究

  更多相關(guān)文章： C-jun 基質(zhì)金屬蛋白酶-20 Mmp20 Smad3 成釉細(xì)胞

【摘要】：目的通過(guò)分析Mmp20基因下游啟動(dòng)子上的AP-1位點(diǎn)和Smad位點(diǎn),探討C-jun和Smad3在Mmp20基因表達(dá)中的作用。方法1、對(duì)p-Mmp20的分析：首先構(gòu)建包含不同長(zhǎng)度p-Mmp20片段的熒光素酶報(bào)告基因載體；然后通過(guò)雙熒光素酶檢測(cè)Smad3對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的影響；并將小鼠有功能的Mmp20啟動(dòng)子基因序列與人的相應(yīng)序列進(jìn)行BLASTN分析及TFSEARCH、TESS分析。2、Smad3促進(jìn)p-Mmp20轉(zhuǎn)錄活性的研究：首先雙熒光素酶分析不同劑量Smad3對(duì)p-Mmp20 (-157bp～+23bp)活性的影響；其次凝膠遷移實(shí)驗(yàn)觀察Smad3核蛋白與標(biāo)記探針的相互作用；利用基因定點(diǎn)突變技術(shù)使Mmp20啟動(dòng)子序列(-157bp～+23bp)內(nèi)Smad及AP-1位點(diǎn)突變,然后雙熒光素酶觀察Smad3對(duì)野生型及突變型啟動(dòng)子活性的影響。3、C-jun影響Mmp20基因表達(dá)的研究：首先雙熒光素酶分析不同劑量C-jun對(duì)p-Mmp20 (-157bp～+23bp)活性的影響及C-jun對(duì)p-Mmp20 (M3-MT-SBS, M3-MT-ABS, M3-MT-DS)活性的影響；其次通過(guò)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)觀察C-jun核蛋白與標(biāo)記探針之間的結(jié)合；然后雙熒光素酶觀察C-jun與Smad3對(duì)p-Mmp20 (-157bp～+23bp)活性的調(diào)節(jié)。4、磷酸化C-jun與磷酸化Smad3在ALC中表達(dá)的研究：利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)在Smad3存在情況下,C-jun對(duì)Mmp20基因表達(dá)的影響；利用免疫組化技術(shù)研究磷酸化C-jun與磷酸化Smad3在ALCs內(nèi)的表達(dá)。5、分析Smad3通路與JNK通路在Smad3、C-jun調(diào)控Mmp20基因表達(dá)中的作用：利用RT-PCR分析在Smad3 inhibitor存在情況下,C-jun對(duì)Mmp20基因表達(dá)的影響；利用RT-PCR分析在JNK inhibitor存在情況下,Smad3對(duì)Mmp20基因表達(dá)的影響。 結(jié)果1、雙熒光素酶檢測(cè)不同長(zhǎng)度Mmp20啟動(dòng)子的熒光素酶活性發(fā)現(xiàn)：從-157bp～-73bp之間存在順式作用元素。BLASTN分析發(fā)現(xiàn)人鼠該序列具有同源性。TFSEARCH、TESS分析該功能性序列得到Smad及AP-1結(jié)合位點(diǎn)。2、雙熒光素酶分析發(fā)現(xiàn)Smad3促進(jìn)p-Mmp20 (M3)的熒光素酶活性并具有劑量依賴(lài)性；電泳遷移率實(shí)驗(yàn)可以觀察到含Smad結(jié)合位點(diǎn)的探針與Smad3核蛋白具有相互作用；雙熒光素酶檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Smad3過(guò)表達(dá)可上調(diào)M3的轉(zhuǎn)錄活性；與M3-WT相比,Smad3位點(diǎn)的突變可明顯抑制M3的活性(P0.05)。3、雙熒光素酶檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：低劑量的C-jun促進(jìn)M3啟動(dòng)子活性,高劑量的C-jun抑制M3啟動(dòng)子活性；AP-1位點(diǎn)突變后,只是輕微改變C-jun對(duì)M3啟動(dòng)子活性的抑制效應(yīng),Smad位點(diǎn)突變后,C-jun明顯增強(qiáng)M3啟動(dòng)子活性,AP-1及Smad位點(diǎn)均突變后完全消除C-jun對(duì)M3活性的影響。凝膠遷移實(shí)驗(yàn)得出C-jun核蛋白可以與標(biāo)記探針上的AP-1位點(diǎn)結(jié)合,C-jun與Smad3的復(fù)合物可以與標(biāo)記探針上的Smad位點(diǎn)結(jié)合。雙熒光素酶檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在C-jun存在的情況下,Smad3抑制M3的活性。4、RT-PCR分析：低劑量C-jun促進(jìn)Mmp20 mRNA的表達(dá)與Smad3沒(méi)有明顯聯(lián)系；與對(duì)照組相比,在Smad3存在的情況下,高劑量C-jun明顯抑制Mmp20的表達(dá)。免疫組化分析發(fā)現(xiàn)p-Smad3在出生后3d、5d、7d小鼠下頜第一磨牙成釉細(xì)胞核內(nèi)的分布含量沒(méi)有明顯改變；而p-C-jun的含量逐漸增加。5、RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)在Smad3 inhibitor存在的情況下,C-jun促進(jìn)Mmp20表達(dá)；在JNK inhibitor作用下,Smad3增強(qiáng)Mmp20表達(dá)。 結(jié)論證實(shí)Smad3通過(guò)作用于p-Mmp20上的Smad位點(diǎn)促進(jìn)Mmp20表達(dá)；低劑量C-jun通過(guò)p-Mmp20上的AP-1位點(diǎn)促進(jìn)Mmp20的表達(dá),高劑量C-jun與Smad3形成復(fù)合物通過(guò)Smad位點(diǎn)抑制Mmp20的表達(dá)；JNK通路參與了Smad3對(duì)Mmp20表達(dá)的調(diào)節(jié),Smad3通路參與了C-jun對(duì)Mmp20表達(dá)的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：C-jun 基質(zhì)金屬蛋白酶-20 Mmp20 Smad3 成釉細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R781
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-34
• 結(jié)果34-44
• 討論44-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 文獻(xiàn)綜述51-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳偉 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

2 王啟偉;Smad蛋白信號(hào)網(wǎng)絡(luò)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年04期

3 張遠(yuǎn)強(qiáng),胡靜,劉新平,許若軍;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,魏玉華,于鑫,彭吉潤(rùn);Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

5 鄭啟新;王運(yùn)濤;郭曉東;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

6 王運(yùn)濤,鄭啟新,郭曉東,吳永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年03期

8 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

9 尚政軍;修復(fù)相關(guān)基因Smad3的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年05期

10 楊曉 ,孫彥洵 ,周江 ,黃培堂 ,黃翠芬 ,徐曉玲 ,李翠玲 ,GotayJessica ,陳林 ,鄧初夏;Establishment of murine Smad5 double knockout ES cells and the studies on their properties[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 霍艷英;李剛;胡迎春;周平坤;吳德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

2 張素平;張然;陳峰;張麗霞;陳曄光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 王劍;楊曉;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 劉昭廷;王強(qiáng);孟安明;;基因組水平上受斑馬魚(yú)Smad2調(diào)控的靶基因[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 楊曉;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)七屆一次青年研討會(huì)暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 通訊員 俞志新　記者 李水根;骨碎補(bǔ)總黃酮可以促進(jìn)骨形成[N];健康報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黎錦;氨氯地平通過(guò)調(diào)節(jié)Smad的表達(dá)防止腎臟纖維化[D];武漢大學(xué);2014年

2 張俊文;TGF-β信號(hào)通路中兩個(gè)與TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 胡祥鵬;復(fù)方芪參提取物調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)及miR-145、miR-21表達(dá)發(fā)揮抗肝纖維化—肝細(xì)胞癌作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐濤;NLRC5通過(guò)NF-κB與TGF-β1/Smad通路調(diào)控肝星狀細(xì)胞炎癥因子分泌和纖維化的功能及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 徐洪杰;回轉(zhuǎn)條件下成骨細(xì)胞微絲對(duì)BMP2信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控[D];西北工業(yè)大學(xué);2015年

6 黃闖;FTY-720調(diào)節(jié)去勢(shì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化Smad信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王加紅;IL-6對(duì)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路介導(dǎo)缺血心肌重構(gòu)的影響及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

8 田彥;三步序貫法對(duì)激素依賴(lài)型哮喘患者及激素撤減過(guò)程中氣道重塑模型大鼠TGF-β_1/Smad信號(hào)通路的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 計(jì)磊;突變體p53與生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子β信號(hào)在肺癌發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中的作用[D];華東師范大學(xué);2015年

10 牛立慢;TGF-β1/Smad3在四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及其作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林琳;SnoN蛋白在RPE細(xì)胞TGF-β/Smad信號(hào)通路中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 丁雪峰;芪藶強(qiáng)心提取物阻斷Smad3信號(hào)通路抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李祥亭;N-乙酰半胱氨酸對(duì)大鼠肺纖維化模型肺組織Smad家族基因表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 李鑫靜;Smad4、Kindlin-2和Anxa2基因在胃癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 汪呈;靶向Smurf1 HECT結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑的細(xì)胞學(xué)水平驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

6 田茜華;補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)體外培養(yǎng)IVF-ET患者卵巢顆粒細(xì)胞中ACTA及其Smads信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李春杰;新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用[D];蘇州大學(xué);2015年

8 孫景英;CXCL9和Smad3的表達(dá)與新疆維吾爾族銀屑病發(fā)病關(guān)系的研究[D];石河子大學(xué);2015年

9 黃海平;MiR-145通過(guò)靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[D];蘇州大學(xué);2015年

10 劉昌偉;Smad2通過(guò)抑制TGF-β1/Smad3介導(dǎo)的膠原合成在肝纖維化中起保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：843736