本文關(guān)鍵詞：microRNA-188作用于靶基因SIX1負(fù)調(diào)控ERK信號(hào)通路抑制口腔鱗癌細(xì)胞的增殖侵襲

  更多相關(guān)文章： SIX1 口腔鱗癌 增殖 侵襲 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 miR-188

【摘要】：[目的]摸索SIX1、miR-188在口腔鱗癌組織細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng)及其所能具有的能力。分析SIX1在口腔鱗癌細(xì)胞中發(fā)揮其作用所依賴(lài)的信號(hào)通路以及miR-188在口腔鱗癌細(xì)胞中的潛在分子機(jī)制。[方法]原發(fā)性腫瘤樣本、口腔鱗癌新鮮組織以及相對(duì)應(yīng)的臨近的健康組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)；細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；Western blot;集落形成實(shí)驗(yàn)；MTT實(shí)驗(yàn)；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期；基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)；熒光素報(bào)告實(shí)驗(yàn)。[結(jié)果]1.SIX1在口腔鱗癌中的表達(dá)：正常的口腔上皮細(xì)胞里是沒(méi)有SIX1表達(dá)陽(yáng)性染色的。在80例的口腔鱗癌病理樣本里有32例的SIX1呈現(xiàn)細(xì)胞核和細(xì)胞漿陽(yáng)性反應(yīng)。2.SIX1對(duì)于口腔鱗癌的臨床意義：SIX1的過(guò)度表達(dá)同較高的TNM分級(jí),瘤體不同時(shí)期以及是否有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。3.SIX1促進(jìn)口腔鱗癌細(xì)胞的增殖和侵襲：Detroit 562細(xì)胞系內(nèi)源增殖數(shù)量偏大,KB細(xì)胞系內(nèi)源增殖數(shù)量偏小。SIX1轉(zhuǎn)染后能夠顯著上調(diào)SIX1信使RNA以及相應(yīng)蛋白質(zhì)的表達(dá)量,siRNA基因干擾則能起到相反的作用。MTT發(fā)現(xiàn)SIX1轉(zhuǎn)染能夠增強(qiáng)KB細(xì)胞系的增殖能力,經(jīng)過(guò)siRNA處理的Detroit 562細(xì)胞系則阻礙細(xì)胞增殖。transwell實(shí)驗(yàn)證明了,SIX1干擾后細(xì)胞的增殖浸潤(rùn)弱化而SIX1轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖浸潤(rùn)顯著增強(qiáng)。4.SIX1調(diào)控cyclin D1以及MMP-2:SIX1轉(zhuǎn)染能夠顯著提高cyclin D1以及MMP-2蛋白合成,SIX1干擾則抑制了這些蛋白的合成。5.SIX1通過(guò)ERK信號(hào)通路調(diào)控MMP-2：SIX1過(guò)表達(dá)能夠明顯提高ERK的磷酸化能力,相反對(duì)于JNK和p38的磷酸化能力不產(chǎn)生改變。6.SIX1調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化：SIX1過(guò)度表達(dá)能夠降低KB細(xì)胞群內(nèi)E-cadherin的含量水平,相反SIX1干擾會(huì)略提高E-cadherin的含量水平。同時(shí)SIX1對(duì)Snail和Twist蛋白質(zhì)的表達(dá)還具有正向調(diào)控作用。7.miR-188在口腔鱗癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)-13腔鱗癌病理組織內(nèi)miR-188的含量顯著下調(diào)。口腔鱗癌病理組織細(xì)胞中miR-188含量較相應(yīng)的健康部分為少,比值為0.457。8.miR-188在體外細(xì)胞系中的表達(dá)：Detroit 562細(xì)胞群內(nèi)miR-188的含量并不高,而FaDu細(xì)胞群內(nèi)miR-188的含量略高。miR-188 mimic轉(zhuǎn)染能夠顯著上調(diào)Detroit 562細(xì)胞系中miR-188的表達(dá)量；但miR-188抑制劑能夠顯著下調(diào)FaDu細(xì)胞系中miR-188的含量。9.miR-188在體外能夠調(diào)控細(xì)胞的增殖和侵襲miR-188 mimic轉(zhuǎn)染后Detroit 562細(xì)胞系集落形成數(shù)目顯著降低,miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染后FaDu細(xì)胞系集落形成數(shù)目顯著增加。基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)中Detroit 562細(xì)胞系中外源性miR-188含量增加,穿過(guò)基底膠的細(xì)胞總量明顯降低。miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染FaDu細(xì)胞系,穿過(guò)基質(zhì)膠到達(dá)上層的細(xì)胞數(shù)目明顯增加。10.miR-188在體外能夠調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程：經(jīng)過(guò)miR-188 mimic爭(zhēng)染后能夠抑制細(xì)胞由G1向S轉(zhuǎn)變,經(jīng)過(guò)miR-188抑制劑處理的細(xì)胞系能夠促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程的轉(zhuǎn)變。11.miR-188上調(diào)cyclin D1, cyclin E和MMP9蛋白的表達(dá)量：經(jīng)過(guò)miR-188 mimic轉(zhuǎn)染后能夠顯著下調(diào)cyclin D1, cyclin E和MMP9的表達(dá)量,miR-188抑制劑轉(zhuǎn)染能夠明顯上調(diào)以上蛋白質(zhì)的表達(dá)量。12.miR-188負(fù)調(diào)控致癌基因SIX1:Detroit 562細(xì)胞系轉(zhuǎn)染后,miR-188的過(guò)量表達(dá)能夠顯著減少SIX1信使RNA的表達(dá)量。13.S1X1為miR-188作用的直接靶基因：載有野生型SIX1基因的Detroit 562細(xì)胞系,經(jīng)過(guò)miR-188mimic的轉(zhuǎn)染之后,熒光含量測(cè)定呈現(xiàn)降低的趨勢(shì),而載有突變型SIX1基因的Detroit562細(xì)胞系中熒光強(qiáng)度則沒(méi)有明顯變化。表明SIX1基因的3'端非編碼區(qū)域是miR-188的直接結(jié)合位點(diǎn),并通過(guò)這樣的結(jié)合下調(diào)SIX1信使RNA的表達(dá)量。miR-188與SIX1信使RNA表達(dá)量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。SIX1基因千擾后發(fā)現(xiàn)：SIX1能夠消除siRNASIX1對(duì)于cyclin D1以及MMP9蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)的影響。在SIX1基因沉默的FaDu細(xì)胞系中,使用miR-188抑制劑也未能上調(diào)cyclin D1以及MMP9蛋白質(zhì)的表達(dá)量。[結(jié)論]1.SIX1于人類(lèi)口腔鱗癌病理組織中呈過(guò)量表達(dá)。2.SIX1的過(guò)表達(dá)對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)有促進(jìn)作用。3.SIX1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)的作用機(jī)制為ERK-MMP-2信號(hào)傳導(dǎo)以及上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化(EMT).4. miR-188是口腔鱗癌細(xì)胞中一種下調(diào)的miRNA,并且它是一種惡性腫瘤細(xì)胞抑制劑。5.在口腔鱗癌病理組織中miR-188通過(guò)SIX1基因達(dá)到抑制細(xì)胞的擴(kuò)增和浸潤(rùn)的目的。
【關(guān)鍵詞】：SIX1 口腔鱗癌 增殖 侵襲 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 miR-188
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.8
【目錄】：

• 英文縮略語(yǔ)5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 技術(shù)路線13-14
• 1. 課題研究背景14-16
• 2. 實(shí)驗(yàn)一 SIX1在口腔鱗癌中過(guò)表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖及侵襲的研究16-33
• 2.1 材料與方法16-25
• 2.2 結(jié)果25-31
• 2.3 討論31-32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 3. 實(shí)驗(yàn)二 SIX1通過(guò)ERK信號(hào)通路以及EMT促進(jìn)細(xì)胞侵襲33-42
• 3.1 材料與方法33-38
• 3.2 結(jié)果38-40
• 3.3 討論40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 4. 實(shí)驗(yàn)三 microRNA-188在口腔鱗癌細(xì)胞中下調(diào)并通過(guò)靶基因SIX1抑制細(xì)胞的增殖與侵襲42-60
• 4.1 材料與方法42-51
• 4.2 結(jié)果51-59
• 4.3 討論59-60
• 4.4 小結(jié)60
• 5. 全文總結(jié)60-62
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 文獻(xiàn)綜述67-77
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 個(gè)人簡(jiǎn)介77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況77-78
• 致謝78

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7 宿穎;葛麗華;苗聰聰;張敏;張辛燕;;三氧化二砷對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2013年01期

8 黃曉君;葉茂昌;李容新;王來(lái)平;;姜黃素對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及相關(guān)蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2007年02期

9 ;Possible Mechanism Responsible for Changes of β-dystroglycanin Oral Squamous Cell Carcinoma[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2006年01期

10 李德超;李善昌;關(guān)鍵;;口腔鱗癌細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子表達(dá)水平與其對(duì)順鉑敏感性的研究[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2007年11期

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2 張志光;張謙;何一青;陳詩(shī)書(shū);;細(xì)胞因子基因修飾人口腔鱗癌細(xì)胞的體外生物學(xué)行為[A];第一屆全國(guó)口腔頜面部腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

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6 盤(pán)杰;量子點(diǎn)熒光技術(shù)標(biāo)記口腔鱗癌細(xì)胞中bcl-2、bax蛋白的應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

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