本文關(guān)鍵詞：Wnt5a敲除小鼠上顎板發(fā)育異常的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 腭裂 Wnt經(jīng)典信號(hào) Wnt5a 細(xì)胞骨架

【摘要】：腭裂是常見(jiàn)的一種由于上顎板發(fā)育缺陷而導(dǎo)致的先天性畸形。Wnt信號(hào)通路在上顎板的正常發(fā)育過(guò)程中具有重要的作用。Wnt5a是Wnt家族的一員,可以激活經(jīng)典Wnt信號(hào)；也可以抑制經(jīng)典Wnt信號(hào),同時(shí)激活非經(jīng)典Wnt信號(hào)。前人研究表明,Wnt5a表達(dá)缺失會(huì)造成腭裂。因此本實(shí)驗(yàn)將利用Wnt5a敲除小鼠,進(jìn)一步探究在上腭板發(fā)育過(guò)程中,Wnt5a是否調(diào)控經(jīng)典Wnt和BMP信號(hào)通路,以及篩選Wnt5a調(diào)控的下游靶基因,更加闡明Wnt5a在上腭板發(fā)育中的調(diào)控機(jī)制。首先,收取E14.5天TOP-gal小鼠(經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的報(bào)告小鼠)的上腭板,X-Gal染色后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典Wnt信號(hào)處于未激活狀態(tài)。然后將E14.5天的Wnt5a-/-';TOP-gal小鼠上腭板進(jìn)行X-Gal染色,發(fā)現(xiàn)前后端均無(wú)X-Gal染色的陽(yáng)性信號(hào),表明Wnt5a的表達(dá)缺失并不能上調(diào)Wnt經(jīng)典信號(hào)表達(dá)。其次,在顱面部的器官發(fā)育中,Wnt與BMP信號(hào)通路不僅具有表達(dá)上的重合,而且兩者之間還相互調(diào)控。收取E13.5天的BRE-LacZ小鼠(經(jīng)典BMP信號(hào)通路報(bào)告小鼠)上顎板X(qián)-Gal染色后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典BMP信號(hào)在前端處于未激活狀態(tài)(X-Gal染色陰性),而在后端大量激活。然后將E13.5天的Wnt5a-/-;BRE-LacZ小鼠上腭板進(jìn)行X-Gal染色,發(fā)現(xiàn)其染色結(jié)果與BRE-LacZ小鼠并無(wú)差異,表明Wnt5a的表達(dá)缺失并不能激活BMP經(jīng)典信號(hào)表達(dá)。最終,為了探究在上腭板中Wnt5a所調(diào)控的差異基因,然后收取小鼠的上腭板前后端組織,進(jìn)行基因芯片分析。結(jié)果顯示,Wnt5a缺失之后,AP1(activator protein1)基因家族成員Fos、Fosb、Junb、Jun和參與細(xì)胞骨架調(diào)控的Cfll等基因表達(dá)水平大幅提高。進(jìn)一步利用real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。然后用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對(duì)上腭板前后端間充質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞骨架進(jìn)行染色。結(jié)果表明,在前后端間充質(zhì)細(xì)胞中,Wnt5a表達(dá)缺失造成了細(xì)胞骨架紊亂。綜上所述,在上腭板發(fā)育早期,Wnt5a不調(diào)控Wnt和BMP經(jīng)典信號(hào)通路；Wnt5a的表達(dá)缺失上調(diào)AP1家族相關(guān)基因表達(dá),進(jìn)而造成細(xì)胞骨架紊亂,導(dǎo)致上腭板不能正常閉合,發(fā)生腭裂。
【關(guān)鍵詞】：腭裂 Wnt經(jīng)典信號(hào) Wnt5a 細(xì)胞骨架
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R782.22
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-5
• 中文文摘5-11
• 緒論11-21
• 一、哺乳動(dòng)物上顎板的發(fā)育過(guò)程11-12
• 二、哺乳動(dòng)物上顎板發(fā)育的分子學(xué)機(jī)制12-16
• 1、Shh信號(hào)分子12-13
• 2、BMPs信號(hào)分子13-14
• 3、TGF-β信號(hào)通路14-15
• 4、FGF信號(hào)分子15-16
• 三. Wnt信號(hào)通路在小鼠上顎板發(fā)育過(guò)程中的調(diào)控作用16-17
• 四. 非經(jīng)典Wnt信號(hào)對(duì)細(xì)胞骨架以及細(xì)胞極性遷移的調(diào)控作用17-19
• 五. 轉(zhuǎn)基因小鼠在研究上顎板發(fā)育領(lǐng)域中的應(yīng)用19-20
• 六. 本研究的目的和意義20-21
• 第一章 材料與方法21-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料21-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-35
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析35-45
• 2.1 Wnt5a~(-/-)小鼠次級(jí)腭裂的可靠性驗(yàn)證35
• 2.2 Wnt5a的表達(dá)缺失對(duì)Wnt經(jīng)典信號(hào)表達(dá)的影響35-37
• 2.3 Wnt5a的表達(dá)缺失對(duì)BMP經(jīng)典信號(hào)表達(dá)的影響37-39
• 2.4 上顎板間充質(zhì)中Wnt5a缺失對(duì)細(xì)胞骨架的影響39-45
• 第三章 討論45-51
• 3.1 Wnt5a缺失小鼠上顎板發(fā)生腭裂45
• 3.2 上顎板間充質(zhì)中Wnt5a不對(duì)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路起調(diào)控作用45-46
• 3.3 上顎板間充質(zhì)中Wnt5a不對(duì)經(jīng)典BMP信號(hào)通路起調(diào)控作用46-47
• 3.4 上顎板間充質(zhì)細(xì)胞中Wnt5a表達(dá)缺失引起AP1家族基因上調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞骨架紊亂47-51
• 第四章 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果61-63
• 致謝63-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65-67

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