本文關(guān)鍵詞：ClC-3氯通道介導甲狀旁腺激素對MC3T3-E1細胞成骨分化的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:骨代謝紊亂包括骨形成和骨吸收過程的不調(diào),骨吸收障礙可導致骨質(zhì)硬化癥,而骨形成不足會引起骨質(zhì)疏松癥。骨質(zhì)疏松癥患者的骨密度降低、骨量減少、骨小梁排列紊亂的特點也給其缺牙種植修復、錯牙合畸形正畸矯治等口腔臨床治療帶來了諸多問題,嚴重影響著患者的健康和生活質(zhì)量。甲狀旁腺素(PTH)是體內(nèi)調(diào)節(jié)骨代謝的重要激素之一,已有研究表明持續(xù)性給予PTH刺激可造成骨量丟失及骨密度降低,而間斷性給予PTH刺激可使骨密度及骨強度顯著增高,其具體機制復雜而不明確。Cl C-3氯通道是一類電壓門控型的離子通道,然而Cl C-3基因敲除小鼠表現(xiàn)出生長阻滯及骨發(fā)育的異常,著提示我們Cl C-3氯通道可能與骨發(fā)育和骨代謝有關(guān)。我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Cl C-3氯通道存在于成骨細胞中,具有增強細胞體外礦化能力及促進成骨分化的作用。既然PTH和Cl C-3氯通道在骨代謝過程中都具有促進骨形成的作用,那么研究二者在成骨分化過程中是否具有某種內(nèi)在的聯(lián)系就具有重要的意義。研究目的:本研究旨在通過觀察在不同濃度及不同給藥方式的PTH刺激下,MC3T3-E1細胞中Cl C-3氯通道及成骨相關(guān)基因的表達變化,并通過干擾Cl C-3氯通道的表達來初步探索成骨細胞中Cl C-3氯通道在PTH的促進成骨分化過程中的作用,為PTH在促進成骨作用的機制研究提供新的思路。研究內(nèi)容:(1)研究不同濃度及不同給藥方式的PTH刺激對MC3T3-E1細胞增殖能力及其成骨相關(guān)基因表達的影響。(2)研究PTH刺激對MC3T3-E1細胞中Cl C-3氯通道表達的影響。(3)初步探究Cl C-3氯通道在PTH促成骨分化中的作用。研究方法:(1)通過CCK-8試劑盒法檢測不同實驗分組的MC3T3-E1細胞的增殖情況,同時利用Real-Time PCR法檢測MC3T3-E1細胞中成骨相關(guān)基因Alp、Runx2的表達情況。(2)通過Real-Time PCR方法及細胞免疫熒光法檢測PTH刺激對Cl C-3氯通道表達的影響,初步分析兩者之間的關(guān)系。(3)利用免疫熒光方法檢測不同Cl C-3氯通道表達水平的MC3T3-E1細胞在PTH刺激下Cl C-3氯通道蛋白的變化情況,利用Real-Time PCR檢測各組細胞中成骨相關(guān)基因及Clcn3的表達情況,并進一步觀察各組細胞體外礦化能力的變化。研究結(jié)果:(1)10-9 M的PTH間斷刺激下,MC3T3-E1細胞中Alp、Runx2的表達最顯著。(2)10-9 M的PTH間斷刺激時,MC3T3-E1細胞中的C l C-3氯通道表達量在各實驗組中最強。(3)10-9 M的PTH刺激MC3T3-E1細胞,C l C-3 si RNA干擾組比C l C-3氯通道正常表達組的成骨相關(guān)基因表達量明顯降低,同時,體外礦化能力也減弱。結(jié)論:(1)合適濃度的PTH間斷刺激有促進成骨細胞成骨分化作用。(2)MC3T3-E1細胞中的Cl C-3氯通道能夠響應PTH的刺激發(fā)生變化。(3)Cl C-3氯通道介導了PTH對成骨細胞的促成骨分化作用。
【關(guān)鍵詞】：甲狀旁腺激素 ClC-3氯通道 骨代謝 成骨分化 基因轉(zhuǎn)染
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781
【目錄】：

• 縮略語表6-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 文獻回顧14-24
• 第一部分 PTH刺激對MC3T3-E1細胞增殖能力及成骨相關(guān)基因表達的影響24-33
• 1 材料24-25
• 1.1 實驗材料24
• 1.2 實驗儀器24
• 1.3 細胞系24-25
• 2 方法25-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)25
• 2.2 PTH處理細胞25
• 2.3 細胞形態(tài)學的分析25
• 2.4 細胞增殖能力檢測25-26
• 2.5 細胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄26
• 2.6 Ream- Time PCR26-27
• 2.7 統(tǒng)計學方法27
• 3 結(jié)果27-31
• 3.1 不同濃度PTH刺激對MC3T3-E1細胞形態(tài)的影響27-28
• 3.2 不同濃度PTH刺激對MC3T3-E1細胞增殖的影響28-29
• 3.3 不同濃度PTH刺激對MC3T3-E1細胞成骨相關(guān)基因（Alp、Runx2）表達影響29-31
• 4 討論31-33
• 第二部分 PTH刺激對MC3T3-E1細胞中ClC-3 氯通道表達的影響33-40
• 1 材料33-34
• 1.1 實驗材料33
• 1.2 實驗儀器33-34
• 1.3 細胞系34
• 2 方法34-35
• 2.1 細胞培養(yǎng)34
• 2.2 PTH處理細胞34
• 2.3 細胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄34
• 2.4 Ream- Time PCR34-35
• 2.5 細胞免疫熒光實驗35
• 2.6 統(tǒng)計學方法35
• 3 結(jié)果35-38
• 3.1 不同濃度PTH對MC3T3-E1細胞中Clcn3基因表達的影響35-36
• 3.2 PTH對MC3T3-E1細胞中C lC-3 氯通道蛋白表達的影響36-38
• 4 討論38-40
• 第三部分 ClC-3 氯通道在PTH刺激促進MC3T3-E1細胞成骨分化中的作用40-50
• 1 材料40-41
• 1.1 實驗材料40
• 1.2 實驗儀器40-41
• 1.3 細胞系41
• 2 方法41-43
• 2.1 細胞培養(yǎng)41
• 2.2 細胞處理41-42
• 2.3 免疫熒光檢測MC3T3-E1細胞中C lC-3 蛋白的表達42
• 2.4 Real- Time PCR檢測MC3T3-E1細胞中成骨相關(guān)基因的表達42-43
• 2.5 細胞體外礦化能力檢測43
• 2.6 統(tǒng)計學方法43
• 3 結(jié)果43-48
• 3.1 各組MC3T3-E1細胞中C lC-3 氯通道蛋白的表達水平43-45
• 3.2 不同ClC-3 氯通道表達水平對PTH刺激下MC3T3-E1細胞成骨相關(guān)基因表達的影響45-46
• 3.3 ClC-3 氯通道介導的PTH刺激促進MC3T3-E1細胞成骨分化的作用46-48
• 4 討論48-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻51-60
• 個人簡歷和研究成果60-61
• 致謝61-62

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