目的:群體感應(yīng)（Quorum Sensing,QS）是指細(xì)菌通過感知菌群密度變化來調(diào)控自身重要基因表達(dá)的群體行為。N-（3-氧代十二烷�；�-L-高絲氨酸內(nèi)酯(N-（3-oxododecanoyl）-L-homoserine lactone,AHL)是最具代表性的一類群體感應(yīng)分子,由銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa,P.a）分泌。研究指出AHL對宿主細(xì)胞具有非常廣泛的生物學(xué)調(diào)節(jié)作用。例如,AHL可通過損傷細(xì)胞線粒體或激活膜表面死亡受體來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;AHL還有廣泛的免疫調(diào)節(jié)功能諸如破壞上皮細(xì)胞連接、誘導(dǎo)免疫細(xì)胞趨化、激活核因子-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。另一方面,口腔內(nèi)存在多種細(xì)菌,通常情況下菌群之間相互平衡維持的共生關(guān)系并不致病,但在某些重癥牙周炎和持續(xù)性根尖周病等以骨缺損為主要癥狀的口腔疾病中,機(jī)會致病菌P.a會被特征性的檢出,且有學(xué)者提出牙周主要致病菌合并P.a感染顯著增加了牙周病的炎癥和骨破壞的程度,因此,P.a與骨損傷之間可能存在因果關(guān)系。此外,P.a常以生物膜的形式存在,有研究指出,AHL在P.a...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:AHL對成骨細(xì)胞凋亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 AHL細(xì)胞培養(yǎng)液的配制及細(xì)胞處理
            2.2.3 細(xì)胞狀態(tài)觀察
            2.2.4 細(xì)胞活性測定
            2.2.5 TUNEL細(xì)胞凋亡檢測
            2.2.6 蛋白提取及Western blotting
            2.2.7 線粒體膜電位去極化測定
            2.2.8 細(xì)胞熒光染色
            2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AHL抑制成骨細(xì)胞活性
        3.2 AHL誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡
        3.3 AHL誘導(dǎo)成骨細(xì)胞表達(dá)Cleaved-Caspase-3及Cleaved-PARP
        3.4 AHL在成骨細(xì)胞線粒體中的熒光共定位
        3.5 AHL導(dǎo)致成骨細(xì)胞線粒體膜電位去極化
        3.6 AHL誘導(dǎo)細(xì)胞色素c由線粒體內(nèi)異位至細(xì)胞質(zhì)中
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:AHL對成骨細(xì)胞分化的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 ALP染色
            2.2.2 ALP活性測定
            2.2.3 茜素紅染色
            2.2.4 RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AHL對成骨細(xì)胞狀態(tài)的影響
        3.2 AHL對成骨細(xì)胞ALP染色和ALP活性的影響
        3.3 AHL對成骨細(xì)胞鈣化結(jié)節(jié)形成的影響
        3.4 AHL對成骨分化標(biāo)志基因表達(dá)的調(diào)控
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:AHL調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子釋放模式影響成骨細(xì)胞凋亡和分化
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設(shè)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞熒光染色
            2.2.2 胞內(nèi)Ca²⁺測定
            2.2.3 蛋白提取及Western blotting
            2.2.4 ALP染色、ALP活性及RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AHL募集于成骨細(xì)胞ER并促進(jìn)胞內(nèi)Ca²⁺釋放
            3.1.1 AHL在成骨細(xì)胞ER中的熒光共定位
            3.1.2 AHL誘導(dǎo)成骨細(xì)胞胞內(nèi)Ca²⁺釋放
        3.2 改變胞內(nèi)Ca²⁺釋放模式抑制AHL誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡并部分恢復(fù)成骨細(xì)胞分化
            3.2.1 W7 改變AHL誘導(dǎo)下成骨細(xì)胞胞內(nèi)Ca²⁺的釋放模式
            3.2.2 W7抑制AHL誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡
            3.2.3 W7部分解除了AHL對成骨細(xì)胞分化的抑制作用
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新型的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：4045572