目的:探討整合素α6(integrin alpha 6)對人牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和成牙本質(zhì)向分化的影響。方法:采用酶消化法,體外分離并培養(yǎng)hDPSCs,構(gòu)建整合素α6沉默慢病毒,感染hDPSCs,分為陰性對照組(shMock)和整合素α6沉默組(shITGA6)。采用噻唑藍(lán)(MTT)法及對增殖標(biāo)志物Ki-67進(jìn)行免疫熒光染色,檢測整合素α6對hDPSCs增殖的影響;采用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、Western blot檢測礦化相關(guān)蛋白牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(dentin matrix protein-1,DMP-1)的表達(dá)以及茜素紅染色檢測整合素α6對hDPSCs成牙本質(zhì)向分化和礦化的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示,沉默組hDPSCs的增殖能力明顯降低(P<0.01);Ki-67免疫熒光染色結(jié)果顯示,沉默組Ki-67陽性細(xì)胞率明顯低于陰性對照組(P<0.001)。堿性磷酸酶染色結(jié)果顯示,沉默組A...

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圖1熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白的表達(dá)評估ITGA6沉默慢病毒感染hDPSCs的感染效率(×100)

沉默組在各時(shí)間點(diǎn)的A值均小于陰性對照組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Day1:P=0.0079;Day3:P=0.00037;Day5:P=0.00080;Day7:P=0.00061),表明整合素α6促進(jìn)hDPSCs的增殖(圖3)。圖2Westernblot檢測ITGA6的表達(dá)

圖2Westernblot檢測ITGA6的表達(dá)

圖1熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白的表達(dá)評估ITGA6沉默慢病毒感染hDPSCs的感染效率(×100)圖3陰性對照組和沉默組的細(xì)胞增殖

圖3陰性對照組和沉默組的細(xì)胞增殖

圖2Westernblot檢測ITGA6的表達(dá)2.2.2Ki-67免疫熒光染色

圖4Ki-67免疫熒光染色

礦化誘導(dǎo)14d后,與陰性對照組(shMock)相比,沉默組(shITGA6)的礦化誘導(dǎo)相關(guān)蛋白DSPP、DMP-1的表達(dá)量明顯上調(diào)(P<0.05,圖6),提示整合素α6抑制hDPSCs的成牙本質(zhì)向分化。DSPP:shMock組:1.108±0.087;shITGA6組:1.90....

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