目的：采用海藻酸鈣凝膠囊化山羊TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞,建立纖維軟骨細(xì)胞體外立體培養(yǎng)模型；研究評(píng)價(jià)不同的持續(xù)、間歇短期壓力對(duì)體外培養(yǎng)的山羊TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白多糖和Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)影響。方法：1.取健康一月齡山羊雙側(cè)TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨組織,剪碎,0.2%Ⅰ型膠原酶消化過(guò)夜獲取關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨原代細(xì)胞,接種至培養(yǎng)瓶培養(yǎng),傳至P2代細(xì)胞。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化及貼壁率,熒光顯微鏡下采集細(xì)胞生長(zhǎng)圖像,培養(yǎng)細(xì)胞爬片,甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。經(jīng)鑒定具備正常表型的P2代山羊TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨細(xì)胞,以5x105/ml密度接種到海藻酸鹽溶液中,形成纖維軟骨細(xì)胞-藻酸鈣凝膠復(fù)合體三維培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察凝膠小球內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；蕃紅O與Ⅰ型膠原免疫組化染色,觀察蛋白多糖、Ⅰ型膠原的分布。2.凝膠小球隨機(jī)分為七組,一組設(shè)為對(duì)照,其余六組經(jīng)不同持續(xù)、間歇壓力處理后,取一批凝膠球作鈣黃綠素—碘化丙啶的熒光染色進(jìn)行凝膠球內(nèi)活、死細(xì)胞的測(cè)定；各組剩余的樣本通過(guò)解珠液將凝膠球溶解,重新獲取纖維軟骨細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)測(cè)定細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白多糖和Ⅰ型膠原的mRNA的水平表達(dá)。結(jié)果... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    1.1 TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)的結(jié)構(gòu)和組成
    1.2 TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞、細(xì)胞基質(zhì)與力學(xué)特性的聯(lián)系
    1.3 TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨細(xì)胞力學(xué)的生物學(xué)反應(yīng)
    1.4 細(xì)胞海藻酸鈉凝膠復(fù)合三維培養(yǎng)的應(yīng)用
    1.5 熒光定量RT-PCR技術(shù)與應(yīng)用
    1.6 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)一 山羊TMJ關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞的獲取和藻酸鹽囊化關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞三維培養(yǎng)環(huán)境的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
實(shí)驗(yàn)二 海藻酸鹽凝膠囊化關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞短期壓力下蛋白多糖和Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞類(lèi)型及分布表征在組織構(gòu)建中的設(shè)計(jì)意義[J]. 舒維娜,康宏,張衛(wèi)平,李欣,包廣潔.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(46)
[2]3種加載方式下正常人下頜骨三維有限元應(yīng)力分布分析[J]. 孫健,張富強(qiáng),王冬梅,于嘉,王成燾.  上�？谇会t(yī)學(xué). 2004(01)

碩士論文
[1]動(dòng)態(tài)和靜態(tài)壓力作用對(duì)山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞凝膠組織基質(zhì)代謝的影響[D]. 柯一凡.蘭州大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3522734