【目的】牙周炎是一種影響牙周組織的炎癥性疾病。宿主細胞可以采用多種防御策略來應答厭氧細菌的入侵,維持組織內(nèi)的穩(wěn)態(tài),包括巨噬細胞的呼吸爆發(fā)以清除微生物,分泌趨化因子來招募全身防御細胞,以及產(chǎn)生生長因子來增強防御能力;這種炎癥反應可能伴隨著宿主細胞合成代謝和分解代謝的根本改變。在炎癥代謝過程中,琥珀酸（Succinate）是一種成熟的促炎代謝物,琥珀酸脫氫酶（succinate dehydrogenase,SDH）是將其脫氫轉化的關鍵酶,而琥珀酸水平影響低氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor,HIF-1α）的活性,HIF-1α是促炎基因表達的關鍵轉錄因子。本實驗的研究目的是研究牙周炎發(fā)病過程中,Succinate-SDH-HIF-1α介導的代謝重組在慢性牙周炎發(fā)病過程中的作用,為認識和干預牙周炎提供理論依據(jù)和指導。【方法】首先在體外實驗中,采用牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）刺激牙周膜成纖維細胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）,通過氣相色譜-質(zhì)譜儀（ga... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

葡萄糖在人類肝臟中的利用[28]

南京大學碩士學位論文4當糖酵解產(chǎn)物丙酮酸減少時，細胞可以通過谷氨酰胺或脂肪酸代謝以補充TCA循環(huán)并維持OXPHOS。相反，當氧含量減少或TCA循環(huán)中斷時，細胞通過無氧糖酵解將丙酮酸轉化為乳酸而非乙酰輔酶A來參與代謝產(chǎn)生ATP[31]；盡管糖酵解產(chǎn)生的ATP比TCA循環(huán)少，但糖酵解的產(chǎn)生ATP速率較TCA循環(huán)快，這對能量的維持至關重要[13]。細胞代謝改變是腫瘤的重要特征，許多腫瘤細胞經(jīng)歷了OXPHOS向糖酵解的代謝轉變，并通過中斷的TCA循環(huán)來實現(xiàn)腫瘤細胞快速增殖的需要。最近的基礎研究顯示，TCA循環(huán)到細胞無氧糖酵解的產(chǎn)能方式的改變也參與了炎癥過程[32]。圖1.2TCA循環(huán)重要的中間產(chǎn)物及關鍵酶。Fig1.2ImportantintermediatesandkeyenzymesofTCAcycle.Glucose：葡萄糖；Pyruvate：丙酮酸；Acetyl-coa：乙酰輔酶a；Glycolysis：糖酵解；PDH：pyruvatedehydrogenase，丙酮酸脫氫酶；CS：citratesynthase，檸檬酸合成酶；Citrate：檸檬酸；ACO2：aconitase2,順烏頭酸酶2；Isocitrate：異檸檬酸；IDH:isocitratedehydrogenase,異檸檬酸脫氫酶；α-KG：α-ketoglutarate,α-酮戊二酸；α-KGDH：α-ketoglutaratedehydrogenase,α-酮戊二酸脫氫酶；Succinyl-Coa：琥珀酰輔酶a；SCS：Succinyl-Coasynthetase,琥珀酰輔酶a合成酶；Succinate：琥珀酸；SDH：succinatedehydrogenase，琥珀酸脫氫酶；Fumarate：延胡索酸；FH：fumaratehydratase，延胡索酸水合酶；Malate：蘋果酸；MDH：malatedehydrogenase。

南京大學碩士學位論文14圖2.1牙周膜成纖維細胞。2.2.4細胞培養(yǎng)人PDLFs培養(yǎng)液為高糖DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清（fetalbovineserum，F(xiàn)BS）+1%青-鏈霉素；換液前先鏡下觀察細胞匯合度及是否污染，后棄去舊培養(yǎng)液，PBS清洗2次，加入新培養(yǎng)液；鏡下觀察細胞匯合度為90%左右時傳代，使用0.25%胰酶消化1min，等體積含F(xiàn)BS的高糖DMEM培養(yǎng)基終止消化，1：2或1：3傳代，實驗中使用第3-6代細胞。2.2.5細菌培養(yǎng)及用量牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis）ATCC33277，液體培養(yǎng)基為腦心浸出液（3.7g/100mL）+酵母提取液（0.5g/100mL）+甲萘醌（1mg/L）+血紅素（1mg/L）。固體培養(yǎng)基為腦心浸出液（3.7g/100mL）+酵母提取液（0.5g/100mL）+甲萘醌（1mg/L）+血紅素（1mg/L）+瓊脂（1.8g/100mL）+羊血（5mL/100mL）。采用分光光度計讀取細菌OD值計算細菌數(shù)量，在吸收峰為600nm情況下若OD值為1，即細菌濃度為109CFU/mL。每次使用前使用大量PBS清洗3次，4000rpm，4min離心去PBS。根據(jù)細胞匯合度為95%時，每孔細胞數(shù)計算P.gingivalis刺激量：P.gingivalis刺激量（μL）=每孔細胞數(shù)X感染復數(shù)（MOI）/細菌濃度

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3133420