目的研究Fas基因轉(zhuǎn)染對舌鱗癌Tca8113細胞的體外抑制作用,構建Fas基因真核表達質(zhì)粒pBK-Fas并將其轉(zhuǎn)導入舌鱗癌Tca8113細胞,為舌鱗癌的Fas基因治療提供實驗基礎。方法采用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成cDNA擴增Fas基因全長,亞克隆到真核表達載體pBK-CMV內(nèi),構建出重組真核表達質(zhì)粒pBK-Fas,酶切鑒定并測序。脂質(zhì)體法將pBK-Fas轉(zhuǎn)染入Tca8113細胞,RT-PCR檢測FasmRNA表達及半定量分析,瓊脂糖凝膠電泳檢測Fas轉(zhuǎn)染細胞凋亡,流式細胞儀檢測Fas蛋白表達。通過細胞生長曲線描記和軟瓊脂集落形成實驗研究Fas基因的體外抑瘤效應。結(jié)果PCR擴增后的產(chǎn)物在約1008bp處出現(xiàn)明顯的特異性條帶,重組質(zhì)粒pBK-Fas經(jīng)酶切和測序鑒定,表明均含有大小正確的Fas基因片段。經(jīng)檢測Fas基因轉(zhuǎn)染能提高FasmRNA表達水平、Fas蛋白表達強度,以及細胞凋亡指數(shù)。Fas基因轉(zhuǎn)染能提高Fas蛋白的表達強度,由轉(zhuǎn)染前的34.01±4.76上升到轉(zhuǎn)染后的55.72±7.33,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。Fas轉(zhuǎn)染細胞株在Fas抗體作用下能夠有效啟動Fas介導的細胞... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2009年04期 北大核心

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【部分圖文】：

PCR產(chǎn)物電泳圖

癌細胞Tca8113均有Fas表達。轉(zhuǎn)染前和空質(zhì)粒對照組的FasmRNA表達水平較低,轉(zhuǎn)染后表達明顯升高,見圖2。檢測12組未轉(zhuǎn)染和重組質(zhì)粒PBK-Fas轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對照組細胞RT-PCR電泳圖譜的灰度值,未轉(zhuǎn)染組、空質(zhì)粒對照組及轉(zhuǎn)重組質(zhì)粒PBK-Fas轉(zhuǎn)染組的Fas表達量(Fas、p-actin條帶灰度值比值)分別為0·286±0·003、0·291±0·004和·439·安徽醫(yī)科大學學報　Acta UniversitatisMedicinalisAnhui　2009 Aug;44(4)

2.5.1　細胞生長曲線的描記　轉(zhuǎn)染組Tca8113細胞與未轉(zhuǎn)染組細胞接種培養(yǎng)后通過直接記數(shù)法描計Fas轉(zhuǎn)染前后細胞的生長曲線如圖4所示。未轉(zhuǎn)染的Tca8113細胞群體倍增時間為0·8 d,對數(shù)生長期在3~7 d。而轉(zhuǎn)染的Tca8113細胞群體倍增時間為2 d,對數(shù)生長期在4~8 d,最大細胞數(shù)為2·6×105,明顯低于非轉(zhuǎn)染組細胞,說明Tca8113細胞的生長速率低于對照組未轉(zhuǎn)染Tca8113細胞。表1　轉(zhuǎn)染前后Fas蛋白質(zhì)表達的流式細胞檢測(n=12,-x±s)組　別Fas蛋白陽性率(% ) Fas蛋白陽性強度空質(zhì)粒對照90. 87±5. 76 34. 05±5. 26未轉(zhuǎn)染組Tca8113 92. 02±5. 47 34. 01±4. 76PBK-Fas轉(zhuǎn)染組Tca8113 95. 08±7. 86 55. 72±7. 33圖4　轉(zhuǎn)染前后Tca8113細胞生長曲線2.5.2　MTT法檢測細胞增殖抑制率　在MTT法定量檢測中,對數(shù)生長期的未轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染Tca8l13細胞48 h經(jīng)檢測與對照組相比具有不同程度的差異性

【參考文獻】：
期刊論文
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