背景:維甲酸誘導腭裂小鼠是探討基因與環(huán)境相互作用導致先天性腭裂發(fā)生的常用且可靠動物模型之一。維甲酸功能是通過與其膜上受體結合,經細胞漿內的維甲酸結合蛋白運輸?shù)胶藘扰c相應受體結合,最終通過基因轉錄調控來實現(xiàn)的,Wnt、Shh和BMP等信號分子通路中的重要基因都被證明參與到維甲酸致腭裂的發(fā)病過程中,維甲酸導致腭裂的機制是直接影響神經嵴細胞(頜面部突起的起源)的游走和增殖,主要通過干擾DNA合成而抑制腭突間充質細胞的增殖,與Wnt5a, Shh, BMP-4和FGF-10等大多數(shù)基因敲除小鼠的腭裂表現(xiàn)型和發(fā)生機制相似。 目的:驗證本課題組前期完成的維甲酸誘導腭裂小鼠腭組織全基因組篩選中獲得的Wnt信號分子通路相關基因GSK-3β、Fzd3和β-TrCP,觀察其在正常腭突發(fā)育和腭裂形成出生前后表達變化。探討維甲酸誘導腭裂小鼠出生后對Wnt通路的影響。 方法:按照100 mg/kg體重管飼ICR小鼠維甲酸建立小鼠腭裂模型。在無菌環(huán)境下將E18(embryo day18,E18)的胎鼠和出生后PN0(postnatal day 0, PN0)的幼鼠,于體式顯微鏡底下取出腭組織。應用SYBR? GreenⅠ實時定量PCR技術及免疫組織化學方法檢測GSK-3β,Fzd3及β-TrCP的表達水平與部位。 結果:1、出生前后GSK-3β,Fzd3及β-TrCP基因表達水平改變GSK-3β及Fzd3在出生前后均有表達,PN0期表達均高于E18期,其中RA組具有統(tǒng)計學意義(P0.05),WT組無統(tǒng)計學差異(P 0.05);β-TrCP在出生前后均有表達,其中WT組有統(tǒng)計學意義(P0.05),RA組有變化但無統(tǒng)計學差異(P 0.05)。 在E18期RA組和WT組的GSK-3β與Fzd3表達水平無顯著性差異(P 0.05),而β-TrCP在RA組表達水平下調,有統(tǒng)計學意義(P0.05);在PN0期RA組的GSK-3β、Fzd3和β-TrCP表達水平均高于WT組,具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。 2、在出生后GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白分布 PN0期的免疫組織化學結果顯示正常組中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白表達在腭突上皮,口腔側腭上皮表達水平較強,在腭間充質中GSK-3β和Fzd3無表達,β-TrCP呈弱表達。實驗組中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP蛋白強表達在腭突上皮上,尤其是腭中嵴及口腔側上皮表達水平更強,在腭間充質中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP較強。 結論:本研究結果表明在出生后維甲酸誘導腭裂小鼠腭上皮中GSK-3β、Fzd3和β-TrCP等Wnt通路抑制因子表達水平上調,提示了維甲酸可能通過調控上述基因而對Wnt信號分子通路的活化具有抑制作用。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2011
【中圖分類】：R782.21
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
結果
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
致謝

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本文編號：2882754