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地塞米松對體外培養(yǎng)的人牙囊細胞成骨特性影響的實驗研究

發(fā)布時間:2020-10-22 12:38
   牙囊是牙齒萌出前的牙胚中圍繞造釉器和牙乳頭的疏松外胚間充質組織。牙囊中含有形成牙周組織的前體細胞,在牙齒的發(fā)育過程中形成牙骨質、牙周膜和固有牙槽骨。目前認為牙囊靠近發(fā)育中的牙根的最內層發(fā)育為成牙骨質細胞,形成牙骨質;靠近牙槽骨的外層細胞分化為成骨細胞分泌骨基質;中間層發(fā)育為成纖維細胞并產生牙周膜的細胞外基質。由生長因子和細胞分子組成的調控網絡控制牙囊細胞的發(fā)育和功能。牙骨質的形成依靠牙根的形成,牙根形成開始于內釉上皮和外釉上皮增殖形成的Hertwig’s上皮根鞘,來源于上皮根鞘的刺激開始了牙囊前體細胞向成牙骨質細胞的分化。這些刺激物包括釉基質蛋白、層粘連蛋白、Ⅰ型膠原和轉化生長因子β超家族等。 目前對于牙囊細胞的成骨特性研究集中于以下方面:1.體外培養(yǎng)培養(yǎng)牙囊細胞在體外的礦化和和體內成骨實驗研究以及在此過程中的相關基因表達;2.胰島素、地塞米松和BMP-2誘導下牙囊細胞向成骨細胞分化過程中,OCN、BMP-2、Cbfal、DLX—5、MSX—2等基因的mRNA的表達。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)了許多對成骨細胞有影響的因素,其中包括多種生長因子如:骨形成蛋白(BMPs)、轉化生長因子(TGF-β)、成纖維細胞生長因子(FGFs)、胰島素樣生長因子(IGFs)、血小板衍生生長因子(PDGF)、表皮生長
【學位單位】:第四軍醫(yī)大學
【學位級別】:博士
【學位年份】:2006
【中圖分類】:R78
【部分圖文】:

人牙囊細胞,原代培養(yǎng)


化物酶;滴加羊血清37℃溫箱封閉30mni。滴加一抗后置入濕盒4℃過夜。一抗為兔抗人波形絲蛋白單克隆抗體。次日在37℃溫箱復溫lh,滴加二抗37℃孵育30min;加入辣根過氧化物酶復合物37℃下30mni;DAB加30nli/L過氧化氫液光鏡下控制顯色。用PBS液替代一抗設立空白對照,其余步驟不變。經蘇木精核復染,逐級脫水透明后封片。2.結果接種72h后可見經消化松散貼壁的組織塊周圍有細胞呈放散狀爬出,細胞形態(tài)多呈長梭形。組織塊周圍細胞亦生長旺盛,靠近組織塊邊緣混雜有部分立方形多角形形扁平細胞,細胞核大,考慮為上皮來源的細胞混入。培養(yǎng)的人牙囊細胞生長爬滿需要14天。此時可以傳代,利用差速消化法去除混雜的上皮細胞,一般在第二代以后就可以得到純化的牙囊細胞。培養(yǎng)的人牙囊細胞呈梭形、紡錘形或多角形,具有成纖維細胞特性。波絲蛋白細胞染色陽性(圖l、圖2)。

人牙囊細胞,波形絲蛋白


化物酶;滴加羊血清37℃溫箱封閉30mni。滴加一抗后置入濕盒4℃過夜。一抗為兔抗人波形絲蛋白單克隆抗體。次日在37℃溫箱復溫lh,滴加二抗37℃孵育30min;加入辣根過氧化物酶復合物37℃下30mni;DAB加30nli/L過氧化氫液光鏡下控制顯色。用PBS液替代一抗設立空白對照,其余步驟不變。經蘇木精核復染,逐級脫水透明后封片。2.結果接種72h后可見經消化松散貼壁的組織塊周圍有細胞呈放散狀爬出,細胞形態(tài)多呈長梭形。組織塊周圍細胞亦生長旺盛,靠近組織塊邊緣混雜有部分立方形多角形形扁平細胞,細胞核大,考慮為上皮來源的細胞混入。培養(yǎng)的人牙囊細胞生長爬滿需要14天。此時可以傳代,利用差速消化法去除混雜的上皮細胞,一般在第二代以后就可以得到純化的牙囊細胞。培養(yǎng)的人牙囊細胞呈梭形、紡錘形或多角形,具有成纖維細胞特性。波絲蛋白細胞染色陽性(圖l、圖2)。

實驗組,骨鈣蛋白,囊細胞,骨橋蛋白


圖9.實驗組VonKossa染色(x20)等[1田通過體外培養(yǎng)牛牙囊細胞并提測,結果表明,細胞表達低水平的堿性骨橋蛋白和I型膠原的mRNA,未檢達。王演等〔’ooj在體外培養(yǎng)的人胚胎的酸酶mRNA的低水平表達。以上研究結成骨特性。Zhoa等[69]的研究表明體外胞在rhBMP一2的誘導下向成骨細胞、rhBMP一2能增強骨鈣蛋白、骨涎蛋
【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 張楠楠;不同運動方式對模擬失重大鼠骨密度、骨代謝生化指標及股骨Osterix表達的影響[D];華東師范大學;2010年



本文編號:2851608

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