【摘要】： 目的:本研究觀察黃癸素聯(lián)合用藥的體內(nèi)和體外抗腫瘤作用;黃癸素抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制;黃癸素對化學(xué)誘導(dǎo)的倉鼠頰癌的防治作用。 方法:(1)應(yīng)用MTT法檢測黃癸素聯(lián)合臨床常用藥對體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。(2)應(yīng)用小鼠移植性實(shí)體瘤H22、S180的治療試驗(yàn)觀察黃癸素聯(lián)合5-FU的體內(nèi)抗腫瘤活性。(3)通過瓊脂糖凝膠電泳法測定黃癸素對SW480細(xì)胞DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶活性的影響。(4)細(xì)胞-基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)檢測黃癸素對B16細(xì)胞粘附能力的影響。(5)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測黃癸素對B16細(xì)胞遷移能力的影響。(6)應(yīng)用Transwell小室重建基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)分析黃癸素對B16細(xì)胞趨化能力的影響。(7)免疫S-P法測定黃癸素對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)因子CD44V6表達(dá)的影響。(8)明膠酶譜法測定黃癸素對腫瘤細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬酶MMP-2、MMP-9表達(dá)和活性的影響。(9)黃癸素對B16細(xì)胞C57BL/6小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的影響。(10)黃癸素對H22細(xì)胞小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的影響。(11)建立DMBA誘導(dǎo)的倉鼠頰囊癌變的動物模型,于6周、9周和12周系統(tǒng)觀察黃癸素治療組和對照組的局部病變情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)束進(jìn)行病理學(xué)檢查。 結(jié)果: 一、黃癸素聯(lián)合用藥的抗腫瘤療效及相關(guān)機(jī)制 黃癸素聯(lián)用羥喜樹堿對SGC-7901、SW116、HepG2、SW480細(xì)胞具有顯著的協(xié)同抑制作用,與5-FU聯(lián)用對MGC-803、SGC-7901、SW116細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用;與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S180實(shí)體瘤的在體生長;黃癸素對拓?fù)洚悩?gòu)酶都Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。 二、黃癸素抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制初探 黃癸素可抑制B16細(xì)胞與基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,抑制作用呈濃度依賴性。劃痕實(shí)驗(yàn)中,在原始致傷區(qū)的基礎(chǔ)上,用藥組細(xì)胞在Fn上的遷移均受到明顯抑制。Transwell小室,藥物與細(xì)胞作用48h后,細(xì)胞穿越基底膜的能力顯著低于對照組,細(xì)胞侵襲數(shù)與藥物濃度成反比。通過黃癸素作用的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清所表達(dá)的MMP-2、MMP-9活性較對照組有顯著的降低。在體試驗(yàn)顯示黃癸素有一定程度抑制C57BL/6小鼠黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移、小鼠H22肝癌肺轉(zhuǎn)移的作用。 三、黃癸素對化學(xué)誘導(dǎo)倉鼠頰癌的抑制作用 黃癸素36、54、72mg/kg分別作用于DMBA誘導(dǎo)的倉鼠,第9周開始高劑量即有抑制病變發(fā)生的作用,第12周病理檢查見其頰粘膜的不典型增生發(fā)生率、鱗癌發(fā)生率均有不同程度降低,54、72mg/kg組倉鼠頰粘膜的不良增生總發(fā)生率分別為66.6%、53.3%,比模型組(86.6%)分別降低了20%和33.3%。 結(jié)論:黃癸素與5-FU、羥喜樹堿對體外培養(yǎng)的多種腫瘤細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用,可能與其對拓?fù)洚悩?gòu)酶都Ⅰ、Ⅱ活性的抑制作用有關(guān)。在體試驗(yàn)表明黃癸素與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S180實(shí)體瘤的在體生長。細(xì)胞試驗(yàn)顯示黃癸素可降低B16細(xì)胞的粘附、侵襲和遷移能力。在體試驗(yàn)顯示黃癸素可抑制B16黑色素腫瘤和H22肝癌的肺轉(zhuǎn)移。黃癸素對化學(xué)誘導(dǎo)倉鼠頰癌有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R285.5;R739.8
【圖文】：

聯(lián)合黃癸素中高劑量治療組與 5-FU 組比較瘤細(xì)胞密度降低，同時(shí)有炎性細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞及粒細(xì)胞多見巴細(xì)胞及粒細(xì)胞多見（圖 1.1）。圖1.1 黃癸素聯(lián)用5-FU對小鼠腫瘤H22的影響——各組腫瘤組織學(xué)觀察（HE，10×40 ）。A：生理鹽水組；B：25mg/kg 5-FU；C：90mg/kg 黃癸素；D：90mg/kg黃癸素聯(lián)用25mg/kg5-FU2.4 黃癸素聯(lián)用 5-FU 對小鼠移植性腫瘤 S180 的作用小鼠 S180 移植瘤試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃癸素聯(lián)用 5-FU 對腫瘤增長的抑制率高于單用等劑量黃癸素（P<0. 01）和 5-FU，表現(xiàn)為相加或協(xié)同效果，并與黃癸素和 5-FU 均有劑量依賴關(guān)系（表 1.8）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，各組動物的體重增長與對照組比較均有減緩，但黃癸素組較 5-FU 組和二藥聯(lián)用組更輕（P<0. 01），而聯(lián)合用與5-FU組相比沒有顯著性差異，可見體重增長減緩的主要原因可能來自于5-FU。A BC D16

注：與生理鹽水對照組比較，*表示P<0.05，**表示P<0.01▲：與等劑量HB組比較，P<0.05，▲▲：與等劑量HB組比較，P<0.01癸素對 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶的影響黃癸素對 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ活性的影響pBR322DNA 為超螺旋 DNA（下圖第一泳道），當(dāng)拓?fù)洚悩?gòu)酶作用322DNA，其僅有缺口和線性 DNA（第二泳道），當(dāng)黃癸素 2mg/L(如第 TopoⅠ已有明顯抑制作用，缺口和線性 DNA 減少，超螺旋 DNA 增多濃度提高，超螺旋 DNA 增多、缺口和線性 DNA 減少更明顯。pBR322 pBR322 pBR322 pBR32 pBR32 pBR322 pBR322+酶 +酶+HGS +酶+HGS +酶+HGS2 +酶+HGS2 羥喜樹堿1mg/L 2mg/l 4mg/L 8mg/LHB 90/5-FU 30 2.4±1.6**▲▲0.715±0.556**▲▲72.03

圖 1.3 黃癸素對 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ活性的影響討 論黃癸素的先導(dǎo)化合物鹽酸小檗堿已有研究證明其具有抑制多種腫瘤細(xì)胞生誘導(dǎo)分化和凋亡的作用。但是鹽酸小檗堿口服難吸收，靜脈注射副作用多，消化道抗生素應(yīng)用有其優(yōu)勢，但是生物利用度低，難以通過口服給藥發(fā)揮全作用如抗腫瘤等作用，成為阻礙小檗堿擴(kuò)大臨床應(yīng)用的瓶頸所在。黃癸素是堿魚腥草素離子對化合物，其生物利用度提高，且本室的前期研究顯示其同有顯著的體內(nèi)外抗腫瘤作用，具有深入研究的價(jià)值空間。聯(lián)合化療是利用聯(lián)用藥物之間的協(xié)同作用取得比單藥更好的效果。聯(lián)合用藥藥物對腫瘤細(xì)胞的打擊面增寬，同時(shí)減少了耐藥性的發(fā)生，減輕藥物的毒性。的是，幾種藥物聯(lián)合之后，若存在協(xié)同作用，將有利于總療效的提高。因此

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2806180