【摘要】：目的:通過體內外實驗探討人尿源性干細胞促進移動性牙根吸收修復的作用。材料方法:體外實驗:從6位健康成年男性(年齡:25-27歲之間)尿液中分離人尿源性干細胞(hUSCs),通過流式細胞儀檢測細胞表面標志物和多向分化能力檢測,鑒定人尿源性干細胞的間充質干細胞特性。將人尿源性干細胞與成牙骨質細胞株OCCM30以1:1的比例間接共培養(yǎng),進行成骨誘導,于實驗7天,進行堿性磷酸酶活性測定和染色。于實驗21天,進行茜素紅染色。于實驗7天,通過RT-PCR和Western blot檢測成牙骨質細胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP的基因和蛋白表達。于實驗1,3,5和7天,CCK-8細胞增殖活性檢測成牙骨質細胞株OCCM30的增殖情況。體內實驗:選取12只10周齡雄性SD大鼠,對上頜第一磨牙施加100g的力量使其近中移動,建立移動性牙根吸收模型。加力14天后去除矯治力,分為2組,實驗組6只(于第一磨牙近中前庭溝和頰腭側粘膜轉折處注射10×10~4個/mL人尿源性干細胞約1mL,每3天注射1次),對照組6只(未注射任何藥物),10天后處死大鼠,取下包含第一二磨牙在內的牙槽骨骨塊。Micro-CT和HE染色觀察牙根吸收修復情況以及牙槽骨骨小梁參數(shù)變化,TRAP染色觀察破骨細胞數(shù)量,免疫組化檢測OPN,OCN,CAP和MAB1281的表達。結果:1、流式細胞儀檢測顯示代表間充質干細胞表面標志物的CD90,CD146和CD105呈陽性。多向分化能力檢測發(fā)現(xiàn),人尿源性干細胞能向成骨細胞,成脂肪細胞和成軟骨細胞三系分化,說明人尿源性干細胞具有間充質干細胞的特性。2、CCK8檢測發(fā)現(xiàn)人尿源性干細胞能顯著促進成牙骨質細胞的增殖。3、RT-PCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)人尿源性干細胞能顯著促進成牙骨質細胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP基因和蛋白的表達。4、Micro-CT檢測發(fā)現(xiàn),實驗組牙根吸收陷窩體積顯著小于對照組(P0.05)。5、骨小梁參數(shù)檢測發(fā)現(xiàn)骨體積分數(shù)(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th.)實驗組顯著高于對照組(P0.05),結構模型指數(shù)(SMI),骨小梁分離度(Tb.Sp.)和骨小梁數(shù)量(Tb.N.)兩組無差別(P0.05)。6、TRAP染色發(fā)現(xiàn)實驗組內破骨細胞數(shù)量少于對照組。7、免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)OPN,OCN和CAP的表達實驗組高于對照組,MAB1281在實驗組中的表達為陽性。結論:人尿源性干細胞能顯著促進成牙骨質細胞的增殖和成骨表達能力,同時促進大鼠移動性牙根吸收的修復。說明人尿源性干細胞具有促進移動性牙根吸收修復的潛力。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R78
【圖文】：

圖 1-1 人尿源性干細胞的形態(tài)。Figure 1-1 The Morphology of the hUSCs.A：原代 hUSCs，4 天時細胞開始貼壁（標尺：200μm）。B：培養(yǎng) 6 天時，細胞呈“集落狀”（標尺：200μm）。C：培養(yǎng) 12 天后，細胞鋪滿整個孔板，細胞呈長梭形，纖維細胞樣形狀（標尺：100μm）。D：第 3 代 hUSCs（標尺：100μm）。1.10 人尿源性干細胞（hUSCs）表面標志物流式細胞儀檢測結果結果如圖 1-2 所示。流式細胞儀檢測結果顯示代表間充質干細胞表面標志物的CD90，CD105 和 CD146 呈陽性，代表造血干細胞表面標志物的 CD31，CD34 和CD45 呈陰性，說明 hUSCs 具有間充質干細胞的特性，而非造血干細胞。

圖 1-2 人尿源性干細胞表面標志物流式細胞儀檢測結果Figure 1-2 The results of the hUSCs surface marker detected by flow cytometer1.11 人尿源性干細胞（hUSCs）成骨誘導分化結果結果如圖 1-3 所示。細胞在誘導 21 天后，排列較緊密，部分細胞形態(tài)不規(guī)則。實驗組可以看到紅色的鈣化結節(jié)，對照組未見明顯的鈣化結節(jié)。說明 hUSCs 具有成骨分化能力。

【參考文獻】

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1 周艷妮;袁學順;岳子琪;曹寶成;;局部注射淫羊藿苷對大鼠正畸致炎性牙根吸收的影響[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2015年03期

2 黃艷;馬纓衛(wèi);田李靜;靳淑梅;張君;;不同年齡組大鼠正畸力作用下齦溝液中基質金屬蛋白酶的表達[J];上�？谇会t(yī)學;2008年05期

3 韓光麗,賀紅,華先明,汪說之,曾祥龍;大鼠牙移動性根吸收組織內組織蛋白酶K及白細胞介素6mRNA的表達[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2004年04期

本文編號：2729043