【摘要】：組織工程是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和工程學(xué)的原理，對病損組織結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)與重建進(jìn)行研究的一門新興學(xué)科，骨組織工程是一個主要分支。骨髓基質(zhì)細(xì)胞因為具備來源豐富、損傷小、取材方便以及易于體外擴增等優(yōu)勢，成為近年來組織工程骨研究中國內(nèi)外學(xué)者首選的種子細(xì)胞。陶瓷化骨具有天然的骨小梁結(jié)構(gòu)、易于傳導(dǎo)成骨，避免了人工合成材料的孔隙率和孔徑大小及交通等方面的制作難題，而且具有可降解、無免疫原性、來源豐富、制備簡單、經(jīng)濟成本低等優(yōu)點，是理想的骨組織工程支架材料。本實驗采用陶瓷化骨作為支架材料，骨髓基質(zhì)細(xì)胞為種子細(xì)胞，利用rhBMP-2和TGF-β骨形成促進(jìn)作用，構(gòu)建一種新型的骨組織工程修復(fù)方法。 第一部分：CBB／MSCs修復(fù)頜骨缺損的實驗研究 首先進(jìn)行大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)及使用礦化液(10~(-8)M地塞米松、0.01 mol／L β-甘油磷酸鈉、50mg／L維生素C)誘導(dǎo)，然后應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)、MTT檢測、ALP檢測、免疫組織化學(xué)、Von Kossa等方法觀察MSC在礦化液作用下生物學(xué)特性的改變。發(fā)現(xiàn)5天時已經(jīng)有一部分骨髓基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞，誘導(dǎo)20天后可見礦化結(jié)節(jié)。其次觀察復(fù)合方式對骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MSC)的貼附、增殖、分化的影響。將誘導(dǎo)后的MSCs與CBB復(fù)合。體外培養(yǎng)，觀察其對骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨能力的影響。應(yīng)用掃描電鏡、ALP、免 第四軍醫(yī)人學(xué)博卜學(xué)位論文 疫組化等方法觀察，證明MSCs在CBB上能夠很好的貼附、伸展和 繁殖。將礦化誘導(dǎo)后的MSCs接種在CBB上，植于裸鼠及自體大鼠 皮下，觀察thBMP一2和TGF一p等生長因子對MSCs成骨能力的影響， 通過HE、改良Mallory’s三色法、圖像分析觀察骨形成情況。結(jié)果 表明CBB復(fù)合MSCs在自體皮下能夠形成編織骨、板層骨等組織， thBMP一2和TGF一p具有協(xié)同作用，促進(jìn)骨基質(zhì)形成。其次進(jìn)行大鼠下 領(lǐng)骨缺損的修復(fù)。通過HE、改良Mallory’s三色法、圖像分析觀察 新骨形成情況。2周后缺損處的支架材料周圍有新骨形成，缺損處 與支架材料呈骨性連接。本實驗證明:骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外可以 經(jīng)過誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞應(yīng)用于骨組織工程，其與 陶瓷化骨復(fù)合后移植成骨明顯，具有良好的骨組織工程應(yīng)用前景。 第幾部分:CBB/MSCs修復(fù)領(lǐng)骨缺損后牙齒移動研究 在組織工程骨修復(fù)領(lǐng)骨缺損ZW、4W和SW后，在大鼠下頗第 一磨牙和切牙間安裝正畸矯治器，加力近中移動第一磨牙。然后 對移動牙齒牙周組織改建進(jìn)行觀察，并與正常牙周組織對比，以 了解組織工程骨修復(fù)領(lǐng)骨缺損后對正畸牙齒移動的影響。對牙齒 移動速度的研究表明，牙齒在缺損修復(fù)區(qū)的移動速度要快于正常 組織。對缺損修復(fù)區(qū)牙齒移動完成后牙根吸收和牙槽骨高度變化 的研究表明，牙根吸收值和牙槽骨高度喪失比對照組要小。證明 組織工程骨修復(fù)缺損不會對牙齒移動產(chǎn)生不良影響。進(jìn)一步對牙 齒牙周組織改建進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，缺損修復(fù)區(qū)牙齒移動的牙周組織 改建規(guī)律與正常組織相同。但前者破骨細(xì)胞數(shù)量較多，骨陷窩數(shù) 量和面積也較大，BMP免疫組化染色陽性較強。提示骨缺損修復(fù) 區(qū)牙齒移動過程中牙周組織改建活躍，有利于正畸牙齒移動。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R783.5

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本文編號：2729040