【摘要】： 口腔種植技術(shù)的應(yīng)用為義齒修復(fù)學(xué)帶來巨大的變革，其發(fā)展水平已 經(jīng)成為社會醫(yī)療水準(zhǔn)乃至現(xiàn)代化程度的標(biāo)志之一。當(dāng)代生物技術(shù)，材料科 學(xué)、生命科學(xué)、人體科學(xué)、和口腔醫(yī)學(xué)的交織正促使傳統(tǒng)口腔種植材料向 生物活性種植材料過渡。以往，生物相容性的標(biāo)準(zhǔn)往往局限于惰性、無毒 等生物安全原則上。隨著認(rèn)識提高和技術(shù)手段進(jìn)步，新的生物相容性觀念 則強調(diào)材料的生物功能性原則，要求植人體內(nèi)的材料不僅不會給機體帶來 損害，還能在應(yīng)用過程中主動激發(fā)宿主恰當(dāng)?shù)膽?yīng)答反應(yīng)，并按照預(yù)先的設(shè) 計與組織實現(xiàn)理想的結(jié)合。 在口腔種植技術(shù)臨床實踐中，仍然存在一些問題亟待解決和克服。 這些問題給醫(yī)患雙方都帶來極大的不便，同時也嚴(yán)重地制約著種植術(shù)的廣 泛開展。分析這些問題的產(chǎn)生原因，很大程度是由于種植體與組織的結(jié)合 仍不夠完善。種植體與骨組織結(jié)合的減弱和喪失仍舊是絕大多數(shù)種植失敗 的最終原因。因此，如何進(jìn)一步改進(jìn)種植體與骨組織的結(jié)合，提高結(jié)合強 度仍然是擺在我們面前的一個重要課題。解決這一難題，必須從種植材料 入手，不斷地提高其生物相容性和生物活性。 將促進(jìn)成骨細(xì)胞附著和功能表達(dá)的活性因子預(yù)先固定在材料表面， 對表面生物反應(yīng)進(jìn)行有效控制，這樣就可以對種植體-骨組織結(jié)合界面進(jìn) 行特異性調(diào)控，提高材料的生物活性。本研究基于細(xì)胞粘附生物學(xué)的最新 研究成果，采用現(xiàn)代化學(xué)和表面工程技術(shù)將粘附肽RGD通過共價鍵固定 在實驗材料表面，構(gòu)建種植體生物活性過渡層的實驗?zāi)Ｐ�，通過體外培養(yǎng) 小鼠成骨細(xì)胞，評價這種活性過渡層的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)。 本研究包括三個主要部分 1．材料表面固定RGD肽及表面化學(xué)分析 采用自組裝單層分子技術(shù)將RGD肽固定在實驗試件表面。檢測反應(yīng) 前后材料表面接觸角的變化，計算相應(yīng)的表面能。應(yīng)用X射線光電子能 譜鑒定材料表面的化學(xué)成份、元素比例、元素的化學(xué)環(huán)境、以及肽分子與 一 材料表面的結(jié)合方式。使用反射納D椰析技術(shù)檢測材料表面的功能基 團。 結(jié)果顯示：材料表面固定 RGD后，兩種介質(zhì)的接鵬均升高，表面 能下降，穎明顯的憎水敝。天柑料表面乙 N、O、S元素的刀用分 折顯示肽分子主要通過共價鍵與表面結(jié)合，各元素的比例以及相應(yīng)的價態(tài) 與理論值基本相符，說明 RGD在材料表面仍然保有原來的成分和構(gòu)型。 紅汐光譜分析出現(xiàn)明顯的硼 1峰，腴書度證明表面聰酸狐的 存在。綜合分析表明 RGD在材料表面的排列具有高度的規(guī)律性和有序 －性。 2．小刷即誠骨細(xì)刪分離、培養(yǎng)和熒四癥 采用連續(xù)酶消化法進(jìn)行小鼠頭蓋骨成骨細(xì)胞的分離，反復(fù)貼壁法進(jìn) 行細(xì)胞純化，常規(guī)條件下進(jìn)行細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)。取培養(yǎng)第 2－3代細(xì)胞進(jìn)行 細(xì)胞表型鑒定。鑒定內(nèi)容包括：細(xì)胞形態(tài)的染色觀察、堿性磷酸酶的組 織化學(xué)染色、骨鈣素蛋白的間接贓撇色、細(xì)胞礦化實驗等。 結(jié)果顯示：材料表面細(xì)腿典型成骨細(xì)胞形態(tài)，堿性磷酸酶，骨鈣 素以及鈣鹽沉積斑色陽性。說明本實驗所采用的小鼠成骨細(xì)胞種類單純、 表型典型，具有成骨細(xì)胞特點和功能。 3．材料頒固定RGD肽的細(xì)胞生物學(xué)評價 iRZZ 4照組，觀察成骨細(xì)胞在RGD表面生長。通過細(xì)胞附著實驗、 細(xì)胞鋪展實驗、細(xì)胞增殖實驗、細(xì)胞活性檢驗、細(xì)胞堿性磷酸酶活性檢 測、骨鈣素 mRNA印跡雜交、以及細(xì)胞礦化實驗等方法對比分析材料表 ：面結(jié)合 RGD對成骨細(xì)胞生物學(xué)行為的彤響。 結(jié)果顯示：生物材料表面固定 RGD肽可以顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞對材料 的附著；促進(jìn)細(xì)胞骨架內(nèi)肌動蛋白和紐蛋白的分布、加速細(xì)胞在材料表面 的鋪展；提高細(xì)胞的增殖率�？嚥牧媳砻娴募�(xì)順亡率沒有顯著差異； 在 RGD表面生長的細(xì)胞有較高的堿性磷酸酶活性、其骨鈣素 dA的表 達(dá)也比對照組提前 6天，并且表達(dá)量明顯。RGD表面成骨細(xì)胞的礦化過 程被明顯提前，但礦化量與對照組沒有栽u。 ·3－ 一 通過本研究得出以下結(jié)論：采用自組裝單層肝技術(shù)將粘附肽固定 于材料表面，攤拋，工藝科學(xué)。粘附肽可通過共價鍵牢固鵬合在材 料表面，反應(yīng)前后分子組成和構(gòu)型沒有本恥的改變，肽分子仍然保存原 有的生物活性。分析表明材料表面肽分子的組織分布呈現(xiàn)高度規(guī)律性和有 序性。這種肽分子排列方式無論對體9塌懈還是體內(nèi)實際應(yīng)用都十分 有利；本研究建立的小鼠成骨細(xì)胞體外實雕型細(xì)胞表型典型，可以準(zhǔn)確 反映實驗條件對其生長和功能分化的影響，用于體外細(xì)胞實驗，結(jié)果可信 度高；材料表面固定 RGD肽不僅沒有細(xì)胞毒性，而且可以有效促進(jìn)成骨 細(xì)胞在材料表面的附著、鋪展和增殖，細(xì)胞的砒和功
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R783.1

【引證文獻(xiàn)】

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1 陳永楠;球形孔結(jié)構(gòu)羥基磷灰石陶瓷支架的制備及性能研究[D];西安理工大學(xué);2006年

本文編號：2721309