【摘要】： 目的:采用QCM-D在體外原位、實時和動態(tài)監(jiān)測人全唾液(WS)、腮腺唾液(PS)和下頜下腺/舌下腺唾液(SMSLS)在HA芯片表面吸附和解離的過程。通過自組裝單層膜(SAM)的WS和PS,測量EGCG對WS和PS生物膜的吸附和解離的過程。采用熒光猝滅實驗,以考察EGCG猝滅WS和PS的效果,方法:收集刺激性的上述三種唾液,監(jiān)測唾液蛋白吸附于HA芯片表面以及SAM的WS和PS吸附EGCG所造成的頻率改變(ΔF)和消散因子變化(ΔD),及形成生物膜的質(zhì)量(m)、厚度(h)、剪切彈性模量(μ)和剪切粘度(η)。根據(jù)Langmuir(L)和Freundlich(F)吸附等溫線的相關(guān)系數(shù)判斷EGCG在WS和PS膜表面的吸附模型,計算吸附動力學(xué)常數(shù):L常數(shù)(K)、飽和吸附量(Mm)、F常數(shù)(Kf)、F吸附強度常數(shù)(1/n)。采用EGCG作為WS和PS的熒光猝滅劑,考察EGCG猝滅WS和PS的效果和猝滅類型,計算表觀靜態(tài)猝滅常數(shù)(K)、靜態(tài)猝滅常數(shù)(Ks)、表觀靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)(KA)、靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)(KLB)和結(jié)合位點數(shù)(n)。結(jié)果:SMSLS的蛋白質(zhì)吸附量最大,形成的膜最厚,PS最小,WS介于兩者中間。SMSLS膜的硬度最小,膜的流動性最大,剪切彈性模量和剪切粘度最小。WS膜的硬度介于PS和SMSLS之間。PS膜表面形成EGCG吸附層后,剪切彈性模量和剪切粘度變小。WS膜含水量大,吸附EGCG后部分水分被擠出,因此剪切彈性模量和剪切粘度增大。采用L和F吸附等溫式均可合理表征EGCG對WS和PS膜的吸附行為。相比PS膜,WS膜對EGCG的吸附容量更大,親和力更好。EGCG對WS和PS中的熒光基團敏感性相近。本實驗的猝滅類型是靜態(tài)猝滅,反應(yīng)沒有引起蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變。一個唾液蛋白質(zhì)分子上存一個EGCG結(jié)合位點。結(jié)論:唾液成分不同,在HA上形成生物膜的特性不同;不同唾液生物膜對EGCG吸附的容量和親和力不同;唾液蛋白質(zhì)分子與EGCG結(jié)合形成復(fù)合物使唾液蛋白質(zhì)熒光猝滅。
【圖文】：

[7]。圖1. 兒茶素衍生物3. 吸附作用唾液蛋白質(zhì)對牙表面的吸附，茶色素對唾液蛋白質(zhì)生物膜的選擇性和競爭性吸附，是形成茶色素 唾液生物膜，進而造成外源性牙著色。目前，研究吸附的方法大致可以分為兩大類：傳統(tǒng)的生物化學(xué)法和現(xiàn)代儀器分析法。生物化學(xué)法包括比色法、免疫學(xué)方法、熒光標記法和放射性同位素標記法等[8]。比色法易受到其他物質(zhì)的干擾；免疫學(xué)方法檢測時間較長；熒光標記的方法極有可能會改變吸附蛋白的構(gòu)象和功能，從而影響了蛋白的吸附行為；放射性同位素標記法則容易發(fā)生放射性污染�，F(xiàn)代儀器分析法包括表面等離子共振（surface plasmon resonance, SPR）、消散因子石英晶體微天平（quartz crystal microbalance with dissipation, QCM-D）、橢偏儀(Ellipsometry)和原子力顯微鏡（atomic force microscope, AFM）等等。SPR可以實現(xiàn)對蛋白吸附的實時動態(tài)監(jiān)測，，具有較高的靈敏性，但是它對基底表面要求較高，且需要建立模型。橢偏儀可以測定吸附蛋白的層厚和反射指數(shù)，無需標記，可以實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，但是它需要有一個平整光滑的表面，否則很難實現(xiàn)其精確測量；AFM可以在液相環(huán)境下觀察吸附蛋白的表面形態(tài)

圖2. EGCG的分子結(jié)構(gòu)工作原理聲學(xué)技術(shù)，以石英晶體芯片為傳感器，不僅可度和密度，而且還可以提供多個倍頻的能量消效應(yīng)對其電極表面質(zhì)量變化進行測量的儀器。石、粘度、電導(dǎo)率、介電常數(shù)等）變化非常敏感，微觀過程中的微小變化，獲取豐富的信息，為研提供了一種強有力的手段。ey[9]導(dǎo)出了石英晶體電極表面沉積的金屬膜質(zhì)量uerbrey公式： mNSfΔf = Δρ2其中f 石英諧振英的密度， S石英諧振器電極的面積cm2， Δ
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R78

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本文編號：2678166