【摘要】： 背景: 牙周炎可造成牙齦炎癥、牙周袋形成、牙槽骨吸收以及牙齒松動(dòng),最終可導(dǎo)致牙齒脫落。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的調(diào)查表明牙周病的患病率高達(dá)75%,我國(guó)某些地區(qū)更高達(dá)93%�，F(xiàn)已證實(shí)牙菌斑中細(xì)菌及其產(chǎn)物是牙周病的始動(dòng)因子,尤其是齦下菌斑與牙周組織的破壞關(guān)系密切。對(duì)于牙周病發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的特異性細(xì)菌的控制是牙周病治療的關(guān)鍵。在各種治療方法中,激光作為近四十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型光源,具有普通光源無(wú)可比擬的特點(diǎn):如亮度高、單色性、方向性和相干性好等。從1960年第一臺(tái)紅寶石激光問(wèn)世以來(lái),激光已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。在口腔醫(yī)學(xué)使用的各類(lèi)型激光中,Nd:YAG激光的應(yīng)用最為廣泛。使用脈沖Nd : YAG激光,由光纖傳導(dǎo)進(jìn)入牙周袋內(nèi),光能轉(zhuǎn)換成熱能,凝固及汽化上皮襯里及部分炎癥浸潤(rùn)的軟組織。又由于激光被血紅蛋白特異性吸收,膠原纖維蛋白變性及膠原鏈?zhǔn)湛s,毛細(xì)血管封閉,因而術(shù)區(qū)出血少或不出血,術(shù)野清楚。激光照射創(chuàng)口甚小,不用切開(kāi)牙齦和翻瓣,加上激光有電磁場(chǎng)、生物刺激等效應(yīng),使術(shù)后反應(yīng)很輕,術(shù)后牙齦退縮不明顯,患者樂(lè)于接受。然而脈沖Nd:YAG激光治療牙周炎尚缺乏深入、系統(tǒng)的研究。 目的: 本研究首先通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)比較5種不同劑量脈沖Nd:YAG激光照射對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖作用,選出有效的實(shí)驗(yàn)劑量,為脈沖Nd:YAG激光對(duì)慢性牙周炎的治療供重要理論依據(jù)。建立慢性牙周炎動(dòng)物模型,探討5種不同劑量參數(shù)脈沖Nd:YAG激光用于牙周炎治療的有效性和安全性,并獲得激光對(duì)牙周組織作用的有效方式、激光的適合劑量參數(shù),探討脈沖Nd:YAG激光在臨床應(yīng)用的適用性和可靠性,以期為該激光在臨床慢性牙周炎治療中的應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法: 1、HPDLFs的培養(yǎng)、鑒定及不同劑量激光照射對(duì)HPDLFs增殖力和形態(tài)的影響酶消化法培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞,利用免疫組化ABC法對(duì)原代培養(yǎng)的HPDLFs進(jìn)行波形絲蛋白和角蛋白多克隆抗體染色,作細(xì)胞來(lái)源鑒定。取生長(zhǎng)良好的第5代HPDLFs,在含10㳠胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h后,1.0W 20pps組、1.5W 20pps組、2.0W 20pps組、2.5W 20pps組和3.0W 20pps組激光照射,正常對(duì)照組只進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),72 h后MTT法用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組OD值,評(píng)定激光對(duì)細(xì)胞增殖的影響。將不同激光劑量照射的96孔板HPDLFs ,每孔加入100μl 0.2% TritonX-100 ,考馬斯亮蘭染色,檢測(cè)OD值,探討該激光對(duì)HPDLFs蛋白含量的影響。取在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下培養(yǎng)24 h的96孔培養(yǎng)板HPDLFs,根據(jù)分組進(jìn)行激光照射后,每孔加入1μCi3H-TdR,在液閃記數(shù)儀上測(cè)量每分鐘閃爍記數(shù)(cpm),評(píng)定激光對(duì)HPDLFs DNA合成的影響。 2、將180～220 g,雌雄各半,健康的SD大鼠采用牙頸部結(jié)扎法進(jìn)行建模,8周后隨機(jī)取8只模型大鼠和正常大鼠,觀察檢測(cè)各項(xiàng)牙周指標(biāo),判斷建模是否成功。將建模成功的48只SD大鼠隨機(jī)分為6組,另外8只健康SD大鼠作為正常對(duì)照組,在牙周潔治的基礎(chǔ)上按照1.0W 20pps、1.5W 20pps、2.0W 20pps、2.5W 20pps、3.0W 20pps實(shí)驗(yàn)劑量給予激光照射。末次治療24 h后處死大鼠,對(duì)比各組大鼠的實(shí)驗(yàn)選用牙牙周指標(biāo)(牙周袋深度PD,菌斑指數(shù)PLI,牙齦指數(shù)GI )及牙周組織中SOD、MDA、NO水平,驗(yàn)證脈沖Nd:YAG激光在SD大鼠牙周袋內(nèi)的治療作用。3、建立慢性牙周炎動(dòng)物模型,先取24只隨機(jī)分為:牙周炎對(duì)照組(P組)、激光治療組(L組)、藥物治療組(D)組,另取8只大鼠作為正常對(duì)照組(N組)。建模成功后P組、L組、D組進(jìn)行牙周潔治,L組給予2.0W 20pps劑量激光照射,D組按照200 mg/kg的劑量給SD大鼠灌胃甲硝唑。末次治療24 h后,測(cè)量牙周指標(biāo)并收集實(shí)驗(yàn)選用牙GCF上機(jī)檢測(cè),各組間進(jìn)行比較。治療結(jié)束30 d后取實(shí)驗(yàn)選用牙的牙周組織病理切片觀察組織的愈合情況。 結(jié)果: 1、酶消化法原代培養(yǎng)HPDLFs,免疫組化染色表明,波形絲蛋白染色陽(yáng)性,角蛋白染色陰性,這表明為來(lái)自中胚層的HPDLFs。經(jīng)單因素方差分析的結(jié)果顯示脈沖Nd:YAG激光劑量為1.0W 20pps-2.0W 20pps時(shí),與正常對(duì)照組比較能明顯促進(jìn)HPDLFs增殖,且激光劑量參數(shù)為1.5W 20pps時(shí)作用效應(yīng)最大。N組及1.0W 20pps-2.5W 20pps劑量組蛋白含量明顯高于3.0W 20pps劑量組(P 0. 01),其中2.0 W 20pps劑量組的蛋白含量最高。與N組比較1.0W 20pps-2.5W 20pps劑量組DNA顯著增高, 3.0W 20pps劑量組有所降低(P 0. 01)。 2、在脈沖Nd:YAG激光治療牙周炎動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,激光照射劑量為1.5W 20pps-2.0W 20pps時(shí)可使牙周組織SOD活性、MDA含量達(dá)到正常水平,NO含量接近于正常對(duì)照組的水平。同時(shí)在此劑量范圍內(nèi)在大鼠牙周袋內(nèi)進(jìn)行提拉式掃描照射能有效減少牙周袋的深度,降低PLI、GI指數(shù)。 3、在脈沖Nd:YAG激光與藥物對(duì)比治療慢性牙周炎動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中激光組(L組)、藥物組(D組)的牙周各項(xiàng)指標(biāo)較牙周炎對(duì)照組均有所好轉(zhuǎn)。治療后L組齦溝液中GSH-Px活性高于P組( P 0. 05 ),與N組及D組無(wú)顯著性差異( P 0. 05 )。治療后L組齦溝液中ALP活性高于N組低于P組( P 0. 05) ,與D組無(wú)顯著性差異( P 0. 05 )。在鏡下,L組與D組相似,與牙周炎組(P組)比較,L、D組牙周軟組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕,大量成骨細(xì)胞生成,牙周袋變淺,牙槽骨破壞處于靜止?fàn)顟B(tài)。 結(jié)論: 1、1.0W 20pps-2.0W 20pps激光劑量照射能促進(jìn)HPDLFs增殖,提高蛋白質(zhì)含量,可見(jiàn)脈沖Nd:YAG激光能促進(jìn)HPDLFs的增殖而起到治療牙周炎的作用。 2、動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分表明激光劑量為1.5W 20pps-2.0W 20pps時(shí)對(duì)大鼠慢性牙周炎能起到較好的治療效果。綜合實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)初步確定該激光牙周袋內(nèi)作用的有效、安全劑量為2.0W 20 pps。 3、激光與藥物治療對(duì)比實(shí)驗(yàn)表明2.0W 20 pps劑量激光照射能達(dá)到藥物治療的效果,能有效的降低牙周組織的炎癥程度和破壞程度。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R781.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 徐燕,李頌,程繼光,胡勇,王明麗;人牙齦成纖維細(xì)胞和牙周膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和生物學(xué)特征[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2002年06期

2 謝敏;黃世光;呂芳麗;;大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙齦組織中一氧化氮含量改變的研究[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

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本文編號(hào)：2660974