釉蛋白和EMSP1基因突變同釉質(zhì)形成缺陷癥的關(guān)系及EMSP1基因敲除前期研究
發(fā)布時間:2020-05-09 10:14
【摘要】: 遺傳性釉質(zhì)形成缺陷癥(amelogenesis imperfecta,AI)是遺傳學和臨床上呈現(xiàn)異質(zhì)性表現(xiàn)的癥候群,表現(xiàn)為釉質(zhì)的形成和礦化異常。與釉質(zhì)發(fā)育有關(guān)的各種候選基因結(jié)構(gòu)改變均可導致釉質(zhì)的形成缺陷。本研究以吉林大學口腔醫(yī)學院門診收集到2例遺傳性釉質(zhì)形成缺陷癥家系為基礎(chǔ),對其臨床表型、基因結(jié)構(gòu)以及基因型與表型之間的關(guān)系進行了探討。 家系1受累個體主要表現(xiàn)為前牙牙冠切1/3及后牙咬合面的釉質(zhì)缺損,家系2受累個體主要表現(xiàn)在牙冠的切緣和牙合面1/4~1/3處可見釉質(zhì)呈白色或黃色帶狀區(qū)域,每個家系中受累個體臨床表型相似。根據(jù)Witkop分類,結(jié)合家系系譜圖和患者臨床表型,診斷家系1為局限性發(fā)育不全型AI,屬常染色體顯性遺傳;家系2為雪帽型成熟不全型AI,屬常染色體顯性遺傳。 以釉蛋白基因和釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因為目的基因,采用PCR-SSCP技術(shù)對家系1和家系2釉蛋白基因和釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因突變進行檢測,結(jié)果未發(fā)現(xiàn)PCR-SSCP出現(xiàn)異常的電泳帶,即未發(fā)現(xiàn)釉蛋白基因或釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因位點發(fā)生突變,說明家系1和家系2釉質(zhì)形成缺陷癥不是由釉蛋白基因和釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因結(jié)構(gòu)改變所引起?赡艽嬖谄渌虏』蛟谟再|(zhì)形成過程中起重要作用。 由于對釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶研究資料較少,在釉質(zhì)形成中的作用機制還不完全清楚。本實驗擬建立釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因敲出鼠動物模型,研究釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因突變與臨床表型的相關(guān)關(guān)系,以闡述釉質(zhì)形成缺陷癥的分子機制。首先設(shè)計并構(gòu)建了針對小鼠釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因exon 4和exon 5區(qū)域進行敲除的置換型打靶載體,為建立釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因敲除小鼠模型而進一步研究該基因的功能奠定實驗基礎(chǔ)。依據(jù)已完成的釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶基因序列分析結(jié)果,結(jié)合GenBank上提供的小鼠EMSP1基因序列,利用Oligo 6.0軟件設(shè)計兩對引物,分別擴增長為5000bp和1700bp片段作為同源長短臂。將其分別插入通用型基因敲除載體pSSC-9的正向篩選基因neo兩側(cè),用PCR方法、限制性內(nèi)切酶酶切和DNA序列分析進行鑒定。結(jié)果成功構(gòu)建了小鼠EMSP1基因打靶載體。在此基礎(chǔ)上,采用同源重組方法構(gòu)建具有新霉素抗性的小鼠LIF真核表達載體pcDNA3.1-LIF,并通過基因轉(zhuǎn)染建立了表達LIF的胚胎成纖維細胞,該細胞可有效抑制干細胞的分化。為建立EMSP1基因敲除小鼠模型和進一步研究該基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】:
家系成員未發(fā)現(xiàn)有與釉質(zhì)形成缺陷癥有關(guān)的系統(tǒng)性疾病或綜合征。對皮膚、頭發(fā)、指甲檢查未發(fā)現(xiàn)異常。2.2 臨床表現(xiàn)家系 1 先證者徐某某,,女,23 歲,2004 年 11 月 18 日在吉林大學口腔醫(yī)學院正畸門診就診時發(fā)現(xiàn)患有釉質(zhì)形成缺陷癥。患者全口牙呈棕黃色,前牙牙冠切 1/3 和后牙牙合面的釉質(zhì)缺損,牙本質(zhì)暴露,牙排列不齊,前牙開牙合(圖 1,圖 2)?谇粰z查,牙齦無充血、水腫,下前牙牙齦有齦上結(jié)石Ⅰ°。X 線片顯示,所有牙釉質(zhì)透光性、髓腔形態(tài)及根尖結(jié)構(gòu)均未見異常。家系中受累個體的牙外觀與先證者基本相似,釉質(zhì)病變同樣涉及到全口牙,均出現(xiàn)前牙切緣和后牙牙合面的受累,前牙切 1/3 釉質(zhì)呈線狀缺損,后牙牙合面釉質(zhì)大面積缺損,其余部位的牙釉質(zhì)顏色、硬度及形態(tài)基本正常。除了先證者外,家系中其他受累成員未見開牙合。家系中男女患者的臨床表現(xiàn)相似。
家系成員未發(fā)現(xiàn)有與釉質(zhì)形成缺陷癥有關(guān)的系統(tǒng)性疾病或綜合征。對皮膚、頭發(fā)、指甲檢查未發(fā)現(xiàn)異常。2.2 臨床表現(xiàn)家系 1 先證者徐某某,女,23 歲,2004 年 11 月 18 日在吉林大學口腔醫(yī)學院正畸門診就診時發(fā)現(xiàn)患有釉質(zhì)形成缺陷癥;颊呷谘莱首攸S色,前牙牙冠切 1/3 和后牙牙合面的釉質(zhì)缺損,牙本質(zhì)暴露,牙排列不齊,前牙開牙合(圖 1,圖 2)?谇粰z查,牙齦無充血、水腫,下前牙牙齦有齦上結(jié)石Ⅰ°。X 線片顯示,所有牙釉質(zhì)透光性、髓腔形態(tài)及根尖結(jié)構(gòu)均未見異常。家系中受累個體的牙外觀與先證者基本相似,釉質(zhì)病變同樣涉及到全口牙,均出現(xiàn)前牙切緣和后牙牙合面的受累,前牙切 1/3 釉質(zhì)呈線狀缺損,后牙牙合面釉質(zhì)大面積缺損,其余部位的牙釉質(zhì)顏色、硬度及形態(tài)基本正常。除了先證者外,家系中其他受累成員未見開牙合。家系中男女患者的臨床表現(xiàn)相似。
【學位授予單位】:吉林大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2007
【分類號】:R780.2
本文編號:2655987
【圖文】:
家系成員未發(fā)現(xiàn)有與釉質(zhì)形成缺陷癥有關(guān)的系統(tǒng)性疾病或綜合征。對皮膚、頭發(fā)、指甲檢查未發(fā)現(xiàn)異常。2.2 臨床表現(xiàn)家系 1 先證者徐某某,,女,23 歲,2004 年 11 月 18 日在吉林大學口腔醫(yī)學院正畸門診就診時發(fā)現(xiàn)患有釉質(zhì)形成缺陷癥。患者全口牙呈棕黃色,前牙牙冠切 1/3 和后牙牙合面的釉質(zhì)缺損,牙本質(zhì)暴露,牙排列不齊,前牙開牙合(圖 1,圖 2)?谇粰z查,牙齦無充血、水腫,下前牙牙齦有齦上結(jié)石Ⅰ°。X 線片顯示,所有牙釉質(zhì)透光性、髓腔形態(tài)及根尖結(jié)構(gòu)均未見異常。家系中受累個體的牙外觀與先證者基本相似,釉質(zhì)病變同樣涉及到全口牙,均出現(xiàn)前牙切緣和后牙牙合面的受累,前牙切 1/3 釉質(zhì)呈線狀缺損,后牙牙合面釉質(zhì)大面積缺損,其余部位的牙釉質(zhì)顏色、硬度及形態(tài)基本正常。除了先證者外,家系中其他受累成員未見開牙合。家系中男女患者的臨床表現(xiàn)相似。
家系成員未發(fā)現(xiàn)有與釉質(zhì)形成缺陷癥有關(guān)的系統(tǒng)性疾病或綜合征。對皮膚、頭發(fā)、指甲檢查未發(fā)現(xiàn)異常。2.2 臨床表現(xiàn)家系 1 先證者徐某某,女,23 歲,2004 年 11 月 18 日在吉林大學口腔醫(yī)學院正畸門診就診時發(fā)現(xiàn)患有釉質(zhì)形成缺陷癥;颊呷谘莱首攸S色,前牙牙冠切 1/3 和后牙牙合面的釉質(zhì)缺損,牙本質(zhì)暴露,牙排列不齊,前牙開牙合(圖 1,圖 2)?谇粰z查,牙齦無充血、水腫,下前牙牙齦有齦上結(jié)石Ⅰ°。X 線片顯示,所有牙釉質(zhì)透光性、髓腔形態(tài)及根尖結(jié)構(gòu)均未見異常。家系中受累個體的牙外觀與先證者基本相似,釉質(zhì)病變同樣涉及到全口牙,均出現(xiàn)前牙切緣和后牙牙合面的受累,前牙切 1/3 釉質(zhì)呈線狀缺損,后牙牙合面釉質(zhì)大面積缺損,其余部位的牙釉質(zhì)顏色、硬度及形態(tài)基本正常。除了先證者外,家系中其他受累成員未見開牙合。家系中男女患者的臨床表現(xiàn)相似。
【學位授予單位】:吉林大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2007
【分類號】:R780.2
【參考文獻】
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1 穆亞冰;釉基質(zhì)絲氨酸蛋白酶的結(jié)構(gòu)及生理病理學意義[J];國外醫(yī)學.口腔醫(yī)學分冊;2003年03期
2 王海,陸泉枝,連正興,李寧,吳常信;電穿孔導入綠色熒光蛋白基因于綿羊胎兒成纖維細胞研究[J];中國畜牧雜志;2004年02期
3 侯玉杰,陳蘭英,駱延;遺傳性牙釉質(zhì)發(fā)育不全家系的調(diào)查與分析[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2002年06期
本文編號:2655987
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