【摘要】：舌癌是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤,由于其淋巴、血運(yùn)豐富,早期易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,雖然針對(duì)舌癌的病因、進(jìn)展、臨床轉(zhuǎn)歸及治療方法方面進(jìn)行了大量的研究,有關(guān)舌癌的發(fā)生機(jī)制仍不十分清楚,臨床治療效果仍有待進(jìn)一步提高。針對(duì)包括舌癌在內(nèi)的頭頸部惡性腫瘤的預(yù)防方法、探索有效地治療手段及提高患者生存率一直是研究的重點(diǎn)。研究認(rèn)為,舌癌的發(fā)生與口腔癌前病變的存在及癌變有密切關(guān)系,臨床常見(jiàn)癌前病變包括口腔黏膜白斑、黏膜紅斑和人類乳頭狀瘤等是口腔癌相關(guān)的危險(xiǎn)因素,它們的共同特征是病理學(xué)表現(xiàn)都伴有上皮異常增生。 口腔腫瘤形成受到多種遺傳因素的影響,如癌基因或者抑癌基因的改變。從口腔上皮異常增生發(fā)展到癌變的過(guò)程中有大量的相關(guān)因子參與,其中包括：凋亡調(diào)節(jié)異常、異常DNA表達(dá)和大量組織標(biāo)記物的表達(dá)的改變。環(huán)氧化酶-2(Cycloxygenas-2, COX-2)作為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的的表達(dá)異常發(fā)揮重要作用,通過(guò)選擇性COX-2抑制劑抑制COX-2的活性,成為口腔癌預(yù)防及治療新的熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)及臨床觀察證明,COX-2抑制劑作為輔助治療,增強(qiáng)腫瘤放、化療的敏感性,并減少胃腸道并發(fā)癥的發(fā)生,因此提示我們采用COX-2抑制劑干預(yù)口腔癌前病變白斑惡變的可能性,對(duì)口腔癌的預(yù)防具有重要作用。 本研究針對(duì)COX-2與口腔黏膜發(fā)生癌前狀態(tài)病變及口腔癌發(fā)病的相關(guān)性,以及口腔黏膜局部用藥易吸收的特點(diǎn),通過(guò)DMBA化學(xué)誘導(dǎo)建立SD大鼠舌癌模型,并局部應(yīng)用COX-2抑制劑塞來(lái)昔布抑制進(jìn)行干預(yù),研究局部應(yīng)用塞來(lái)昔布抑制口腔上皮異常增生發(fā)生及惡變的作用,觀察塞來(lái)昔布抑制DMBA誘導(dǎo)的舌癌形成過(guò)程中對(duì)凋亡前體蛋白caspase-3、survivin的表達(dá)的影響,從凋亡機(jī)制方面探討COX-2抑制劑的抗腫瘤作用與促凋亡之間的關(guān)系,為局部應(yīng)用COX-2抑制劑預(yù)防口腔白斑的發(fā)生及惡變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 80只SD大鼠隨機(jī)分成2組,對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各40只。對(duì)照組(A組)為單純舌癌建模組,分為A1、A2、A3和A4組,每組10只。將SD大鼠麻醉后,用砂紙擦拭大鼠的左側(cè)舌緣黏膜,致舌黏膜充血但不滲血,然后用特細(xì)描筆在其舌緣涂抹1%的7,12-二甲基苯并蒽丙酮溶液,每周3次。實(shí)驗(yàn)組(B組)為塞來(lái)昔布局部用藥組,分為B1、B2、B3和B4組,每組10只,在給予與A組相同的處理后,給予6%塞來(lái)昔布膏劑(南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)室協(xié)助配制),每天一次。觀察各組大鼠的生存狀態(tài)、體重變化和腫瘤形成率。分別于第8、12、16和20周處死大鼠,每次每組10只。處死后切取整個(gè)舌體組織,并將舌組織分為兩部分,首先取新鮮病變部分組織500 mg,置于-80℃冰箱保存剩余部分10%中性福爾馬林溶液固定。采用光鏡下觀察DMBA誘導(dǎo)的SD大鼠癌變過(guò)程中舌黏膜變化情況,并用Image-pro plus軟件進(jìn)行分析,測(cè)量各個(gè)標(biāo)本組織上皮層厚度,每樣本上皮取10個(gè)點(diǎn)位進(jìn)行測(cè)量后取均值；采用免疫組化染色和Western blot的方法檢測(cè)舌組織中caspase-3、survivin蛋白的表達(dá)；采用RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)caspase-3、survivin mRNA水平變化。 研究結(jié)果表明：在8周的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中均無(wú)腫瘤的發(fā)生；在12周、16周和20周,對(duì)照組癌變率為分別為20%、60%和70%,而實(shí)驗(yàn)組則僅僅在20周有2只大鼠發(fā)生舌黏膜癌變,其癌變率為20%。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)照組的癌變率為37.5%,實(shí)驗(yàn)組為5%,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。光鏡下觀察發(fā)現(xiàn),隨著DMBA的刺激時(shí)間增加,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的上皮厚度逐漸增加。上皮平均厚度檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組在8、12和16周的上皮平均厚度分別為(103.40±29.40)μm、(108.70±33.80)μm、(105.30±27.50)μm,在20周的大鼠樣本舌黏膜全部發(fā)生病變,未進(jìn)行上皮厚度的比較,而實(shí)驗(yàn)組在8、12、16和20周的上皮平均厚度分別為(77.30±21.80)μm、(63.80±22.10)μm、(88.30±31.70)μm和(95.00±36.20)μm。整個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012)；異常增生病變的上皮厚度比較中,異常增生病變的上皮厚度比較中,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組無(wú)顯著差異(P=0.052),實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均未顯示藥物干預(yù)對(duì)異常增生厚度產(chǎn)生影響。在角蛋白層厚度的比較中,同樣也顯示實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組增厚程度低(P=0.000)；在炎癥浸潤(rùn)程度比較中,對(duì)照組隨著DMBA的刺激時(shí)間增加,炎癥浸潤(rùn)程度逐漸增加,8、12、16和20周的單元面積(5184μm2)炎癥細(xì)胞數(shù)為,6.77±2.36、10.74±10.02、17.68±13.20和17.22±13.88,而實(shí)驗(yàn)組8、12、16和20周單元面積內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)為9.30±2.59、10.04±3.01、9.02±2.08和9.70±3.36,實(shí)驗(yàn)組炎癥浸潤(rùn)程度較對(duì)照組炎癥浸潤(rùn)程度低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.047)。 免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組caspase-3隨著DMBA刺激時(shí)間的增加表達(dá)下降,在8、12、16和20周的平均陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(61.36±6.16)%、(51.18±10.97)%、(48.11±9.57)%和(39.73±11.07)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000),而實(shí)驗(yàn)組caspase-3則未出現(xiàn)明顯變化,8、12、16和20周的平均陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(75.23±7.00)%、(76.75±7.39)%、(79.83±8.56)%和(71.66±16.57)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.394)。但整個(gè)實(shí)驗(yàn)組caspase-3的陽(yáng)性細(xì)胞率明顯高于整個(gè)對(duì)照組caspase-3表達(dá),兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。對(duì)照組survivin的陽(yáng)性細(xì)胞率隨著DMBA作用時(shí)間的增加而逐漸增強(qiáng),在8、12、16和20周的平均陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(12.45±6.07)%、(26.50±20.16)%、(46.33±24.97)%和(58.49±35.94)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),而實(shí)驗(yàn)組survivin則表達(dá)并未出現(xiàn)明顯變化,在8、12、16和20周的平均陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(6.66±3.88)%、(6.45±3.45)%、(5.76±3.87)%和(11.51±12.20)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.242),實(shí)驗(yàn)組survivin的陽(yáng)性細(xì)胞率低于對(duì)照組survivin的表達(dá)率,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。Western blot分析也證實(shí),對(duì)照組caspase-3隨著DMBA刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而表達(dá)下降,其不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),而實(shí)驗(yàn)組中caspase-3的表達(dá)強(qiáng)度并沒(méi)有因DMBA作用時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)變化,其不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.05),但其表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。Western blot檢測(cè)同樣證實(shí),對(duì)照組survivin隨DMBA作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,其不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),而實(shí)驗(yàn)組survivin的表達(dá)雖然也隨在DMBA刺激時(shí)間的增加而增加,其各時(shí)間段的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.049),但其表達(dá)強(qiáng)度明顯低于對(duì)照組,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。 RT-PCR結(jié)果顯示,對(duì)照組caspase-3 mRNA表達(dá)水平隨著DMBA作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降,在8、12、16和20周的caspase-3/β-actin表達(dá)比值分別為0.73±0.12、0.68+0.18、0.48±0.22和0.39±0.22,各時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),而實(shí)驗(yàn)組caspase-3/β-actin表達(dá)比值無(wú)顯著差異,8、12、16和20周caspase-3/β-actin值分別為0.93+0.18、0.97±0.07、0.88±0.17和0.82±0.19,各時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P=0.195)。實(shí)驗(yàn)組caspase-3 mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。對(duì)照組在8、12、16和20周survivin /β-actin表達(dá)比值分別為0.57±0.12、0.72±0.17、0.77+0.15和0.80±0.11,各時(shí)間點(diǎn)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),而實(shí)驗(yàn)組survivin/β-actin表達(dá)比值無(wú)顯著差異,在8、12、16和20周的平均表達(dá)比值分別為0.29±0.10、0.26±0.10、0.36±0.09和0.39±0.11,各時(shí)間點(diǎn)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.125),整個(gè)實(shí)驗(yàn)組survivin mRNA表達(dá)水平低于整個(gè)對(duì)照組Survivin表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?(P=0.000)。 通過(guò)本實(shí)驗(yàn),我們認(rèn)為：局部應(yīng)用6%COX-2抑制劑塞來(lái)昔布膏劑能有效的抑制DMBA化學(xué)誘導(dǎo)SD大鼠舌癌的發(fā)生,其作用除了與抑制口腔上皮異常增生有關(guān)外,更重要的是調(diào)節(jié)與細(xì)胞凋亡發(fā)生有關(guān)的caspase-3、survivin蛋白及mRNA的表達(dá),其可通過(guò)上調(diào)節(jié)caspase-3以及下調(diào)survivin蛋白及及mRNA的表達(dá),繼而影響細(xì)胞的凋亡,這對(duì)于進(jìn)一步探索COX-2抑制劑與舌癌形成,以及應(yīng)用COX-2抑制劑預(yù)防口腔癌前狀態(tài)發(fā)生惡變以及舌癌發(fā)生提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

.2圖1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的建模及藥物干預(yù)過(guò)程A:給予大鼠藥物干預(yù)前，麻醉動(dòng)物;B:用砂紙擦拭實(shí)驗(yàn)老鼠的舌緣豁膜;C:大鼠舌勃膜新生物的觀察，測(cè)量;D:處死大鼠后取下的舌體標(biāo)本Figure1.EXPerimentalanimalmodelanddruginterveniionProcessA:Ratsweregivenanesthesiabeforedrugintervention:B:MueosaafterwiPingwithsandPaPer:C:Newbiologiealofrattonguemueosa:D:TonguesPeeimenS病理組織形態(tài)學(xué)觀察

圖2.不同實(shí)驗(yàn)時(shí)期舌組織組織學(xué)光鏡觀察A:8周實(shí)驗(yàn)組正常舌組織(HE，xl00);B:20周實(shí)驗(yàn)組癌變舌組織(HE，xlOO)C:12周對(duì)照組癌變舌組織(HE，，xl00);D:16周對(duì)照組癌變舌組織(HE，xlOO)E:20周對(duì)照組癌變舌組織(HE，xl00);F:20周對(duì)照組癌變舌組織(HE，xZOO)Figure2.LightmicroscoPePicturesshowingmorphologyofrattonguetissues.A:normaltonguetissueofsthwee此e即erimental卿叩(HE，x100);
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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1 周任;張龍洲;王睿智;;塞來(lái)昔布對(duì)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖、凋亡和Survivin表達(dá)的影響[J];癌癥;2010年03期

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3 徐虹;全培良;周云;王珍珍;蔣東霞;;宮頸癌癌變過(guò)程中Caspase-3、Fas/FasL的表達(dá)及其臨床意義[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2008年01期

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6 趙燕穎;秦中國(guó);邱偉智;潘玉琢;趙麗娟;趙雪儉;;DIM增強(qiáng)順鉑抑制PC-3細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng)[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年03期

7 ;塞來(lái)昔布聯(lián)合順鉑對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2010年10期

8 隋捷,劉積良,段寅;吉西他濱聯(lián)合順鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究[J];中國(guó)腫瘤臨床;2004年23期

9 白桂穎;李凱;;Survivin、COX-2、VEGF在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的相關(guān)性研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2008年01期

10 李斌;劉巍;盧景琛;李建璜;鐘美佐;黃進(jìn);;B細(xì)胞淋巴瘤Survivin和COX-2的表達(dá)及意義[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年19期

本文編號(hào)：2631554