【摘要】： 因創(chuàng)傷、感染、腫瘤及先天性疾病等造成的頜骨缺損十分常見，深入探討其再生修復的分子機制具有重要意義。與軀干四肢骨骼來源于中胚層間充質(zhì)不同，顱頜面骨發(fā)生于顱神經(jīng)嵴源外胚間充質(zhì)，具有獨特的膜內(nèi)成骨機制，外胚間充質(zhì)在成骨向分化中表現(xiàn)出不同的Hoxa2(homeobox a2，Hoxa2)基因活動特點，Hoxa2在顱頜面骨發(fā)生中未發(fā)現(xiàn)表達，但在軀干四肢骨中呈陽性表達，外源性Hoxa2可致下頜骨轉(zhuǎn)型為舌骨。由此提示，成體頜骨與軀干四肢骨在組織再生修復機制方面可能存在差異。本實驗在建立大鼠頜骨及脛骨缺損自限性愈合模型的基礎(chǔ)上，采用組織形態(tài)學、免疫組織化學、RT-PCR等方法分別對其缺損區(qū)愈合骨痂中Hoxa2基因表達進行比較分析，初步探討頜骨獨特的再生修復機制。 方法：取20只健康雄性SD大鼠，隨機分成5組，每組4只。于大鼠左側(cè)下頜骨及脛骨各制備約4mm大小的缺損，作為實驗組，另一側(cè)作為對照組。術(shù)后3天、7天、10天、14天、21天各處死一組動物，分別取出下頜骨及脛骨缺損區(qū)愈合骨痂用于組織學檢測及RT-PCR。用10％多聚甲醛固定，10％EDTA脫鈣，石蠟包埋后切片，進行常規(guī)HE染色及Hoxa2抗體免疫組織化學染色；提取缺損處骨痂及對照骨組織總RNA，以Hoxa2 mRNA第636-880堿基序列設(shè)計引物，β-actin為內(nèi)參，采取RT-PCR擴增，檢測Hoxa2 cDNA表達。 結(jié)果：術(shù)后7天，組織學上見到骨缺損區(qū)新骨形成；術(shù)后14天，缺損區(qū)已基本被新骨代替，但與原正常骨仍有界限；術(shù)后21天與正常骨組織無明顯界限。所有實驗組及對照組脛骨組織均擴增出片段長度為245bp的目的基因條帶，為Hoxa2 cDNA基因片段，半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)實驗組較對照組表達增強，統(tǒng)計學分析有顯著性差異(p＜0.001)；所有實驗組及對照組頜骨組織均未擴增出Hoxa2 cDNA目的基因條帶。免疫組織化學分析對照組及實驗組脛骨均可在細胞中發(fā)現(xiàn)Hoxa2分子表達陽性，實驗組表達明顯增強；對照組及實驗組頜骨均未發(fā)現(xiàn)Hoxa2分子表達。 結(jié)論：1)大鼠下頜骨及脛骨4mm大小的缺損能夠自行骨性愈合。2) Hoxa2在頜骨再生修復中不表達，而在脛骨骨再生修復中表達增強，提示頜骨再生修復可能存在獨特的分子調(diào)控機制。
【圖文】：

南京醫(yī)科大學碩士學位論文擾，嚴密縫合關(guān)閉創(chuàng)口(圖1、2)。3)脛骨缺損的制備:將大鼠左腿外旋，在脛骨內(nèi)側(cè)備皮，消毒后，切開皮膚，皮下組織及肌層，暴露脛骨上端，在此制備同樣大小的骨缺損，欽膜覆蓋固定后，分層縫合。4)清醒后送返動物房(南京醫(yī)科大學動物實驗中心)，采取普通環(huán)境飼養(yǎng)，，術(shù)后連續(xù)三天以抗生素棉球擦拭傷口，預防感染。5)分別于術(shù)后第3天、7天、10天、14天、21天各處死4只大鼠，處死后解剖出手術(shù)側(cè)及對照側(cè)下領(lǐng)骨及脛骨。四、標本處理進行大體標本觀察后用10%中性多聚甲醛固定24小時，然后用10%EDTA液脫鈣5周

圖2術(shù)后第3天領(lǐng)骨標本Fig.1thesamPleofjawboneonday3PostoPeration2一l，exPerimentalgrouP:2一2，eontrolgrouP三、組織學觀察術(shù)后3天見缺損中心充滿大量血細胞，邊緣可見極少的未成熟新骨形成，成纖維細胞增生，炎癥細胞已有所減少(圖3、4);術(shù)后7天邊緣新骨增多，高倍鏡下可見越靠近缺損邊緣，新生骨的成熟程度越高，成骨細胞分化明顯，但數(shù)量較少(圖5、6);術(shù)后10天見缺損中央血管豐富，邊緣新骨增多，可在脛骨邊緣見軟骨細胞及成層排列的成骨細胞，而領(lǐng)骨中未見軟骨細胞(圖7、8);術(shù)后14天缺損
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R782;R683

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本文編號：2621260