發(fā)布時(shí)間：2020-03-27 11:03

【摘要】：近年來(lái)利用干細(xì)胞進(jìn)行牙齒再生研究已經(jīng)成為組織工程研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),其中干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化成為研究的重點(diǎn)問(wèn)題。牙齒發(fā)育過(guò)程涉及諸多基因的調(diào)控,許多的分子生物學(xué)機(jī)制尚不清楚。因此,進(jìn)一步明確牙齒發(fā)生的分子調(diào)控機(jī)制,通過(guò)分析牙齒形態(tài)發(fā)生關(guān)鍵基因,同時(shí)結(jié)合已知的研究成果,對(duì)于進(jìn)一步誘導(dǎo)成體干細(xì)胞向成釉細(xì)胞分化,使其成為具有再生牙齒功能的細(xì)胞,將有重要的指導(dǎo)意義。 目前,人類(lèi)對(duì)胚胎發(fā)育時(shí)期的牙齒形態(tài)發(fā)生過(guò)程有了深入的了解,已有研究證明了人類(lèi)牙齒發(fā)育各時(shí)期與胚胎發(fā)育各時(shí)期的比對(duì)關(guān)系,但是關(guān)于早期牙齒發(fā)育分化的時(shí)間卻大相徑庭。本課題利用組織形態(tài)學(xué)方法觀察了在胚胎發(fā)育各時(shí)期上下頜各個(gè)牙齒的形態(tài)變化,同時(shí)通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法,系統(tǒng)地檢測(cè)了人胚胎發(fā)育各對(duì)應(yīng)時(shí)期上下頜各個(gè)牙齒的發(fā)育分化標(biāo)志物的表達(dá)。研究結(jié)果得出了一個(gè)精確的人類(lèi)齒列的發(fā)育分化時(shí)間表,為現(xiàn)今教科書(shū)上關(guān)于牙齒發(fā)育分化時(shí)間的不統(tǒng)一提供了確切的理論依據(jù),對(duì)教科書(shū)關(guān)于牙齒發(fā)育分化時(shí)間的編著有十分重要的意義,同時(shí)能夠?yàn)槲磥?lái)人類(lèi)牙齒發(fā)育研究提供理論基礎(chǔ)。 本研究參考分離純化角朊細(xì)胞的方法,利用Dispase Ⅱ酶和TE酶兩步法分離出牙胚上皮細(xì)胞,并建立牙上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng),培養(yǎng)10天左右可傳代一次,目前可傳至第三代。應(yīng)用免疫組化方法鑒定出所培養(yǎng)牙上皮細(xì)胞的上皮源性及胚胎源性,同時(shí)表明所分離的牙胚上皮原代細(xì)胞能夠在體外繼續(xù)表達(dá)組織特異性相關(guān)蛋白,該細(xì)胞可作為進(jìn)一步研究牙齒發(fā)育機(jī)制的種子細(xì)胞。 同時(shí),本研究還探討了人牙胚上皮細(xì)胞在體外誘導(dǎo)條件下的成牙潛能。利用嵌合體重組技術(shù)將人牙胚上皮細(xì)胞與小鼠E13.5磨牙牙胚間充質(zhì)重組,移植腎囊膜下培養(yǎng)30天,結(jié)果可見(jiàn)嵌合體組織中具有完整牙齒的結(jié)構(gòu),包括明顯拉長(zhǎng)的成釉細(xì)胞層、牙本質(zhì)、牙釉質(zhì)、成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓復(fù)合體等。但是,也有部分嵌合體并未成牙,而是出現(xiàn)大量骨松質(zhì)結(jié)構(gòu)及囊性細(xì)胞團(tuán)結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn),牙胚上皮細(xì)胞的成牙能力隨著傳代數(shù)的增加而降低。其中P1代細(xì)胞重組體的成牙率接近70%,P2代細(xì)胞重組體的成牙率為32%,P3代細(xì)胞重組體僅為10%。通過(guò)免疫組化和PCR進(jìn)一步分析其原因,結(jié)果表明FGF8、PITX2等基因的表達(dá)隨著傳代次數(shù)的增多而減弱,這些基因在牙上皮細(xì)胞向成釉細(xì)胞分化中可能起到關(guān)鍵的作用。
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R783

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2602874