背景: 牙周炎是牙周組織炎癥性疾病;菌斑細(xì)菌及其產(chǎn)物是牙周炎最主要的病因,是引發(fā)牙周炎必不可少的始動(dòng)因子。成纖維細(xì)胞是牙周組織中最多、功能上最重要的細(xì)胞,任何原因所造成的成纖維細(xì)胞的破壞,均能影響牙支持組織的健康。故一種理想的牙周炎治療藥物,既要達(dá)到良好的抑菌效果,又要保護(hù)牙周組織,具有較小的毒性作用。 目前第3代硝基咪唑類衍生物奧硝唑因其具有較強(qiáng)的抗厭氧菌活性,成為治療牙周炎的主要抗菌藥物,而抗生素的長(zhǎng)期用藥具有逐漸產(chǎn)生耐藥性的潛在隱患。牙周炎作為一種多細(xì)菌混合感染、局部全身因素共同影響的疾病,一種抗厭氧菌的單一藥物無法達(dá)到良好的治療效果,現(xiàn)在普遍推崇聯(lián)合用藥方案。尋求一種可行且有效的聯(lián)合用藥方案成為牙周炎治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。 近年來,蜂膠因其具有廣泛的生物學(xué)活性和藥理作用得到人們的關(guān)注。以往研究已證實(shí)蜂膠和部分抗生素具有抑菌協(xié)同作用,然而主要集中在蜂膠與大環(huán)內(nèi)酯類藥物、多肽類抗生素、氨基苷類抗生素、四環(huán)素和氯霉素類抗生素的聯(lián)合用藥研究,且對(duì)需氧菌,如金黃色葡萄球菌的抑菌活性研究較多。在牙周炎治療領(lǐng)域,將蜂膠與牙周抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用,研究其對(duì)牙周厭氧菌的抗菌活性,目前未見報(bào)道�？紤]蜂膠廣泛的藥物學(xué)作用及協(xié)同抑菌的特點(diǎn),將蜂膠與抗生素聯(lián)合應(yīng)用治療牙周炎,有望成為一種新型配伍方案。 目的: 本研究在參考國(guó)內(nèi)外研究的基礎(chǔ)上,將國(guó)產(chǎn)水溶性蜂膠和奧硝唑聯(lián)合,研究其對(duì)牙齦卟啉單胞菌(Pg)的體外生長(zhǎng)抑制作用及對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞(HGF)的毒性作用,初步探索蜂膠與奧硝唑聯(lián)合治療牙周炎的可行性,為其更加深入地研究提供初步依據(jù)。 材料與方法: 1.蜂膠抑制Pg體外生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究。用心腦浸液(BHI)+Hemin培養(yǎng)基按2倍稀釋法將蜂膠和奧硝唑分別稀釋成8個(gè)濃度和14個(gè)濃度的藥液。每個(gè)試管加入0.5ml標(biāo)化的菌液(106～107CFU/mL),充分混勻后,厭氧培養(yǎng)48 h。觀察試管的混濁情況,選擇適當(dāng)濃度段劃線接種于BHI血瓊脂平板上。經(jīng)厭氧培養(yǎng)48 h,無細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為最小殺菌濃度(MBC),設(shè)立陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。 2.蜂膠奧硝唑聯(lián)合抑制Pg體外生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究。采用紙片擴(kuò)散法,將奧硝唑(0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 g/L五個(gè)濃度)和蜂膠(100、50、25 g/L三個(gè)濃度)單獨(dú)藥敏片及各濃度結(jié)合后的合劑藥敏片貼在接種了Pg的BHI血瓊脂培養(yǎng)基平皿內(nèi)。37℃厭氧培養(yǎng)48 h,測(cè)定每一藥敏片的抑菌環(huán)直徑。每種藥敏片重復(fù)4次。 3.蜂膠奧硝唑聯(lián)合對(duì)HGF的細(xì)胞毒性研究。消化第5代細(xì)胞,接種于96孔板,設(shè)陰性對(duì)照組,在37℃,95%濕度和5%CO2的條件下培養(yǎng)24 h,再用含有各濃度蜂膠、蜂膠奧硝唑合劑或奧硝唑的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h,用MTT比色法測(cè)定吸光度值(A值)。計(jì)算出細(xì)胞相對(duì)增殖率(RGR)。每種試劑選擇RGR約為50%的濃度組進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的研究。消化第6代細(xì)胞,接種于96孔板,每15孔為一組,一共8組,培養(yǎng)24 h。換上含有試劑的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24 h,選擇第1組用MTT比色法測(cè)定A值。其余7組棄去含有試劑的培養(yǎng)液,換上新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),連續(xù)7 d,每天選擇1組進(jìn)行A值測(cè)定。最后繪制各生長(zhǎng)曲線,與陰性對(duì)照組曲線比較。 結(jié)果: 1.蜂膠水溶液對(duì)Pg具有較好的生長(zhǎng)抑制作用,當(dāng)濃度為1.56 g/L時(shí),就無細(xì)菌生長(zhǎng),其作用與0.125～0.25mg/L的奧硝唑相當(dāng)。 2.100 g/L蜂膠的平均抑菌環(huán)大小僅為10.25mm;蜂膠與奧硝唑聯(lián)合后,含100 g/L蜂膠的合劑1組的抑菌環(huán)大小均大于對(duì)應(yīng)濃度的單獨(dú)奧硝唑組,含50 g/L蜂膠的合劑2組和含25 g/L蜂膠的合劑3組在奧硝唑低濃度時(shí)的抑菌環(huán)大小也大于對(duì)應(yīng)濃度的單獨(dú)奧硝唑組。隨著蜂膠濃度的增加,抑菌環(huán)增大。析因分析結(jié)果表明,蜂膠與奧硝唑?qū)g的生長(zhǎng)抑制作用存在協(xié)同作用。 3.隨著藥物濃度的降低,HGF的RGR趨于100%,毒性級(jí)別趨于0。奧硝唑濃度為0.4g/L或0.8g/L時(shí),合劑組的A值均高于對(duì)應(yīng)濃度的奧硝唑組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);奧硝唑濃度為0.2g/L或1.2g/L時(shí),三組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.1.2g/L奧硝唑組、1.2g/L奧硝唑和1g/L蜂膠合劑組、1.2g/L奧硝唑和0.5g/L蜂膠合劑組及4g/L蜂膠組的RGR均約為50%。換上不含藥物的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),連續(xù)7 d測(cè)定每組A值,組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P0.05);各時(shí)間點(diǎn)內(nèi),實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P0.05),但隨著時(shí)間推移,各實(shí)驗(yàn)組的A值均逐漸趨向于陰性對(duì)照組。 結(jié)論: 1.蜂膠對(duì)Pg具有良好的生長(zhǎng)抑制作用,MBC為1.56 g/L。 2.蜂膠奧硝唑聯(lián)合對(duì)Pg的生長(zhǎng)抑制作用優(yōu)于奧硝唑及蜂膠的單獨(dú)用藥,表明蜂膠與奧硝唑?qū)g的生長(zhǎng)抑制作用具有協(xié)同作用。 3. 1g/L和0.5g/L低濃度蜂膠不會(huì)增加奧硝唑?qū)GF的細(xì)胞毒性作用,甚至在奧硝唑部分濃度段,表現(xiàn)出降低奧硝唑細(xì)胞毒性作用的效果。 4.HGF分別在含有1.2 g/L奧硝唑、1.2g/L奧硝唑和1g/L蜂膠合劑、1.2g/L奧硝唑和0.5g/L蜂膠合劑或4g/L蜂膠的培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)24 h后,約50%的細(xì)胞存活,連續(xù)7 d,各組細(xì)胞數(shù)均持續(xù)增加,表明藥物的細(xì)胞毒性作用可逆。 5.蜂膠奧硝唑聯(lián)合應(yīng)用治療牙周炎具有深入研究?jī)r(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R781.4

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本文編號(hào)：2601453