本文關鍵詞：大鼠正畸牙齒移動過程中張力側牙周組織RUNX2、OSX、OPN的表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學》 2012年

局部注射木通皂苷D對大鼠正畸牙周組織改建的影響

王媛  

【摘要】：正畸治療周期一般為1-2年,拔牙矯治時間更長,隨著矯治時間的延長,患者發(fā)生齲病、牙周病的機率也會隨之增大,患者的配合的可能性會逐漸降低。因此自20世紀70年代以來,國內外眾多學者便開始了對加快正畸牙齒移動,縮短正畸治療療程的探索。1982年,日本學者Yamasaki率先在移動牙齒周圍局部注射前列腺素,并取得肯定療效。隨后,越來越多的藥物逐漸被應用于加速正畸牙齒移動的研究中,如維生素D,降鈣素等。近年來,傳統(tǒng)醫(yī)學的治療理念正逐漸為世界所接受,傳統(tǒng)醫(yī)藥受到國際社會越來越多的關注,因此,許多正畸學者將目光轉向傳統(tǒng)中藥,并進行了深入細致的研究。但由于中藥化學成分很繁雜,有效成分定性定量還存在有困難,中藥療效的發(fā)揮可能涉及到多個作用靶點。故無論在細胞水平還是動物整體水平上,中藥的研究難度都很大。在以往的研究中,往往是對一種中藥或者復方制劑在正畸牙齒移動中的作用進行研究,很難揭示中藥促進牙齒移動的具體機制。隨著生物技術的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化的深入,越來越多的中藥有效成分被分離和鑒定,中藥有效成分的單體逐漸被應用于實驗研究中,使從細胞分子水平研究中藥的作用機制成為可能。本研究以大鼠為實驗對象,在成功建立大鼠正畸牙齒移動模型的基礎上,局部注射不同濃度補腎中藥川續(xù)斷的活性化學成分木通皂苷D(川續(xù)斷皂苷Ⅵ, Asperosaponin D, ASD),通過組織學、酶化學、免疫組織化學等技術觀察大鼠正畸牙齒移動速度、牙周組織改建、牙周組織中破骨細胞分化因子(ODF)的表達變化,并與前列腺素E2(PGE2)進行對比,試圖探索一種新的安全有效的加快正畸牙齒移動的方法,為臨床治療提供一定的理論依據(jù)。 目的：本研究通過對大鼠正畸牙齒腭側黏骨膜下局部注射PGE2以及不同濃度ASD溶液,探討不同濃度ASD溶液對正畸牙齒移動速度的影響,以及對正畸牙齒移動過程中牙周組織ODF表達的影響,并與PGE2對正畸牙齒移動的影響進行比較,分析不同濃度的ASD溶液在大鼠正畸牙齒移動過程中的作用,推測ASD對正畸牙移動影響的可能機理,為臨床正畸局部使用ASD促進正畸牙齒移動,提供可供參考的實驗依據(jù)。 方法：選取48只SPF級雌性Wistar大鼠隨機分為ASD1組、ASD2組、PGE2組和對照組,每組12只。首先建立大鼠正畸牙齒移動實驗模型,ASD1組在上頜第一磨牙近中腭側黏骨膜下以5mg/kg的比例局部注射ASD溶液；ASD2組在同樣部位以10mg/kg的比例局部注射ASD溶液；PGE2組按照25gg/kg的比例局部注射PGE2溶液；對照組注射生理鹽水。四組動物分別于正畸加力3、7、14、21、28天后,分批處死,分離大鼠上下頜骨,取上頜骨作為標本,測量各期上頜第一磨牙牙齒移動的距離,隨后,所有標本制成上頜牙周組織切片,分別采用HE染色觀察大鼠第一磨牙加力過程中牙周組織的改建情況,酶化學染色觀察牙周組織中破骨細胞的形態(tài)及數(shù)量變化,免疫組化檢測牙周組織壓力側ODF的表達變化。四組的實驗結果數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示,所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理,采用方差分析和t檢驗,P0.05認為差異有顯著性。 結果： 1.四組動物于正畸加力3、7、14、21、28天牙齒移動距離依次遞增。在加力第3天,與對照組相比,各實驗組動物牙齒移動距離均大于對照組,但只有PGE2組與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05),其他各組與對照組之間相比沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)；與PGE2組相比,ASD1組和ASD2組牙齒移動距離均減小,但只有ASD1組與PGE2組的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在加力第7天,與對照組相比,各實驗組動物牙齒移動距離明顯大于對照組,ASD2組和PGE2組與對照組相比均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),而ASD1組與對照組之間相比沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)；與PGE2組相比,ASD1組和ASD2組牙齒移動距離均減小,但ASD1組與PGE2組的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在加力第14、21、28天,ASD1組、ASD2組和PGE2組牙齒移動距離與對照組相比明顯增大,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；ASD1組與ASD2組和PGE2組相比牙齒移動距離減小,且具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各時間段ASD2組和PGE2組之間牙齒移動距離相比沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)(見表2、圖3) 2.蘇木精-伊紅(HE)染色顯示(見圖5-18)：各組動物遠中張力側牙周膜隨時間增加間隙增寬,牙周組織血管擴張,牙槽骨表面成骨細胞出現(xiàn),新骨形成；近中壓力側牙周膜間隙縮窄,膠原纖維排列紊亂,牙周組織出現(xiàn)透明樣變,牙槽骨呈蠶食狀的吸收陷窩,可見多核細胞的聚集。多核破骨細胞的數(shù)目隨著時間的推移逐漸呈上升趨勢,到第21天多核破骨細胞的數(shù)目達到高峰,隨后,多核破骨細胞的數(shù)目逐漸減少(見表3、圖4) 3.抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色顯示(見圖19-23)：壓力側牙周膜中TRAP陽性細胞的數(shù)目隨著時間的推移逐漸增多,到第21天破骨細胞的數(shù)目達到高峰,隨后破骨細胞的數(shù)目開始下降,這與HE染色的結果保持一致(見圖4)。在加力第3天,各組動物之間多核破骨細胞數(shù)目沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。在加力第7天,與對照組相比,各試驗組動物多核破骨細胞數(shù)目均增加。ASD2組和PGE2組與對照組相比均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),而ASD1組與對照組之間相比沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)；與PGE2組相比,ASD1組和ASD2組多核破骨細胞數(shù)目均減少,但只有ASD1組與PGE2組的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在加力第14、21天,與對照組相比,各試驗組動物多核破骨細胞數(shù)目均顯著性增加(P0.05)；與PGE2組相比,ASD1組和ASD2組多核破骨細胞數(shù)目均減小,但ASD1組與PGE2組的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在加力第28天,與對照組相比,各試驗組動物多核破骨細胞數(shù)目均顯著性增加(P0.05)；與PGE2組相比,ASD2組多核破骨細胞數(shù)目增加,但二者之間的差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),而ASD1組多核破骨細胞數(shù)目減小,且與PGE2組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05) 4.免疫組化染色結果顯示(見圖24-29)：在牙槽骨壓力側出現(xiàn)ODF的表達,且ODF的表達量隨著時間的推移逐漸增加,到第21天ODF的表達量達到高峰,隨后ODF的表達量逐漸降低。這與HE染色以及TRAP染色的結果保持一致。 結論： 1.局部注射ASD可有效提高大鼠正畸牙齒移動速度,增加了牙齒移動距離。 2.ASD可減少壓力側牙周組織透明樣變的形成,增加了牙周組織破骨細胞的數(shù)量,加快骨改建速度。 3.ASD能增強牙周組織中ODF的表達,從而加快了正畸牙齒移動。 4.ASD以1Omg/kg的比例局部注射可以有效的促進正畸牙齒移動,其作用與PGE2促進正畸牙齒移動的效果相似,而ASD以5mg/kg的比例局部注射促進牙齒移動的效果不如PGE2明顯。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R782.054
【目錄】：

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本文編號：244214