【摘要】：目的:探討低劑量條件下脂多糖誘導牙髓細胞DNA損傷方法,為研究脂多糖誘導牙髓細胞DNA雙鏈斷裂及DNA修復提供實驗模型。方法:10μg/L脂多糖連續(xù)刺激牙髓細胞1、3、6次后,采取MTT及TUNEL分別檢測其對牙髓細胞增殖及凋亡的作用;采用q-PCR及免疫印跡檢測γ-H2A.X的mRNA及蛋白水平的表達;使用免疫熒光及免疫組化法觀測γ-H2A.X在體內、外牙髓細胞的表達。結果:與對照組相比,10μg/L脂多糖連續(xù)刺激對牙髓細胞增殖及凋亡均無顯著性差異;脂多糖連續(xù)刺激6次后細胞免疫熒光顯示在細胞核檢測到γ-H2A.X的陽性表達,且蛋白及mRNA水平的表達較對照組有顯著性增加(P0.05);免疫組化結果表明在脂多糖誘導4、6、8d后,γ-H2A.X在大鼠牙髓組織較對照組表達水平顯著升高(P0.05)。結論:低劑量脂多糖連續(xù)刺激可誘導牙髓細胞產生DNA雙鏈斷裂。
[Abstract]:Objective: to investigate the method of DNA damage induced by lipopolysaccharide (LPS) in dental pulp cells at low dose, and to provide an experimental model for the study of DNA double strand break and DNA repair in dental pulp cells induced by lipopolysaccharide. Methods: after 10 渭 g / L lipopolysaccharide was stimulated for 6 times, the proliferation and apoptosis of dental pulp cells were detected by MTT and TUNEL, and the expression of mRNA and protein of 緯-H2A.X were detected by q-PCR and Western blot. The expression of 緯-H2A.X in dental pulp cells in vivo and in vitro was observed by immunofluorescence and immunohistochemistry. Results: compared with the control group, there was no significant difference in proliferation and apoptosis of dental pulp cells stimulated by 10 渭 g / L lipopolysaccharide. After 6 consecutive lipopolysaccharide stimulation, the positive expression of 緯-H2A.X was detected in the nucleus, and the expression of protein and mRNA was significantly higher than that of the control group (P0.05). The immunohistochemical results showed that the expression level of 緯-H2A.X in dental pulp of rats was significantly higher than that of the control group (P0.05) 8 days after lipopolysaccharide induction. Conclusion: continuous stimulation of low dose lipopolysaccharide can induce DNA double strand break in dental pulp cells.
【作者單位】： 武漢大學口腔醫(yī)學院牙體牙髓二科;
【基金】：國家自然科學基金(編號:81120108010、81571438) 湖北省自然科學基金(編號:ZRY2014000940)
【分類號】：R781

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本文編號：2394559