發(fā)布時間：2016-10-28 17:11

  本文關(guān)鍵詞：HEMA對人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響與調(diào)控，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《昆明醫(yī)科大學(xué)》 2015年

HEMA對人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響與調(diào)控

孫素  

【摘要】：HEMA是牙本質(zhì)粘接系統(tǒng)中重要的、分子量最小的親水性單體,通過牙本質(zhì)分子篩特性易于滲入HL內(nèi)部,介導(dǎo)親水性牙本質(zhì)膠原與疏水性樹脂材料結(jié)合。使用含HEMA的全酸蝕粘接系統(tǒng)時,其HEMA可滲入酸蝕后的脫礦牙本質(zhì)中,防止膠原纖維塌陷,客觀上維護了粘接界面的穩(wěn)定,在生物機械力學(xué)方面具有較大的優(yōu)勢。但是,位于粘接界面以下的牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體具有的特殊結(jié)構(gòu),即近髓端的牙本質(zhì)小管存在的牙髓神經(jīng)末梢易受粘接單體刺激�；旌蠈觾�(nèi)的粘接劑長期與牙本質(zhì)密切接觸,其中的未聚合單體可通過牙本質(zhì)小管滲透到牙髓腔,接觸髓腔表層的成牙本質(zhì)細(xì)胞層及深層的牙髓細(xì)胞。此外,殘余單體的析出不僅降低了修復(fù)材料的機械性能,且易對材料生物相容性產(chǎn)生不良影響。目前,針對牙本質(zhì)粘接單體HEMA對人牙髓細(xì)胞及成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMPs表達(dá)的影響鮮見報道。因此,本研究選取牙本質(zhì)粘接系統(tǒng)中常用的基質(zhì)單體HEMA,作用于人牙髓細(xì)胞和由牙髓細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的成牙本質(zhì)樣細(xì)胞,檢測上述細(xì)胞中MMP-2、-9的表達(dá),為樹脂材料與牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中MMPs之間的相互關(guān)系提供實驗依據(jù),為尋求可靠、有效地防止牙本質(zhì)粘接界面退變,提高粘接耐久性的方法及牙髓組織的修復(fù)再生研究奠定基礎(chǔ)。目的：研究牙本質(zhì)粘接單體HEMA對人牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMP-2、-9表達(dá)調(diào)控的影響。方法：組織塊法體外原代培養(yǎng)獲得人牙髓細(xì)胞,以含不同濃度HEMA的DMEM培養(yǎng)基與第3-5代人牙髓細(xì)胞共同培養(yǎng),MTT檢測HEMA作用于牙髓細(xì)胞24、48和72 h的增殖情況,通過倒置熒光顯微鏡分析觀察經(jīng)不同濃度的HEMA處理48 h后細(xì)胞形態(tài)變化；然后,Transwell檢測在非毒性條件下以100.400 μg/ml的HEMA處理牙髓細(xì)胞48 h后,觀察其遷移數(shù)量,按同樣處理方法,Western Blot檢測牙髓細(xì)胞中MMP-2、-9的定量表達(dá)；最后,將牙髓細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化液培養(yǎng)3-4周, RT-PCR檢測DSPP、BSP、ALP的基因表達(dá)情況,牙髓細(xì)胞成功誘導(dǎo)分化為成牙本質(zhì)樣細(xì)胞后,利用明膠酶譜法檢測不同濃度HEMA對成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中MMP-2、-9活性表達(dá)的影響。結(jié)果：HEMA在體外一定程度上抑制牙髓細(xì)胞的增殖,并呈時間濃度依賴性,24 h組的細(xì)胞活力值均顯著高于48 h和72 h組,不同時間點的細(xì)胞活力值均明顯低于各自空白對照(P0.05)；牙髓細(xì)胞經(jīng)HEMA處理48 h后,空白對照組細(xì)胞生長狀態(tài)良好,隨著濃度增加,細(xì)胞密度明顯減低,生長受到抑制,濃度到800 μg/ml時,細(xì)胞開始變?yōu)閳A形,有凋亡跡象,出現(xiàn)細(xì)胞碎片,1500μg/ml時可見大量細(xì)胞死亡,數(shù)目稀少,出現(xiàn)嚴(yán)重變形；含100、400μg/ml HEMA的DMEM培養(yǎng)基作用于牙髓細(xì)胞后,與空白對照組相比,遷移細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P0.05)；同時通過定量分析,隨HEMA濃度增加,與空白對照組相比,MMP-2、-9表達(dá)量明顯降低；牙髓細(xì)胞成功誘導(dǎo)分化為成牙本質(zhì)樣細(xì)胞,HEMA對其中MMP-2、-9的活性具有抑制作用,孵育24 h后呈劑量依賴性抑制,其中濃度為10%HEMA呈現(xiàn)較強的抑制作用,但MMP-2的酶原仍未完全被抑制,采用線性回歸分析HEMA對MMP-2及MMP-9的抑制作用,決定系數(shù)為r2=0.921(p0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,MMP-2、-9與HEMA之間具有較好的擬合效果。結(jié)論：本研究針對HEMA對牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中MMPs活性的抑制作用表現(xiàn)為兩方面的臨床意義：(1)牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞與牙本質(zhì)具有同源性MMPs,HEMA對其中MMPs活性的抑制,可能會保護牙本質(zhì)粘接操作過程中或粘接術(shù)后I型膠原的降解,客觀上維護了樹脂牙本質(zhì)粘接界面的穩(wěn)定,具有提高牙本質(zhì)粘接耐久性的潛能；(2)對牙髓細(xì)胞中MMPs表達(dá)抑制的同時,限制了牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞的遷移,進而影響了修復(fù)性牙本質(zhì)的形成。因此,含HEMA的牙本質(zhì)粘接系統(tǒng)在臨床應(yīng)用中是一把雙刃劍,維持粘接界面穩(wěn)定性的同時又影響了修復(fù)性牙本質(zhì)的形成。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783
【目錄】：

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