本文關鍵詞：正畸治療前后患者口內菌群變化檢測與分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

網友ffy51856fy近日為您收集整理了關于正畸治療前后患者口內菌群變化檢測與分析的文檔，希望對您的工作和學習有所幫助。以下是文檔介紹：研究背景:有報道顯示我國兒童與青少年的錯牙合畸形患病率為67.82%[1]。頜面部畸形直接影響到兒童頜面部生長發(fā)育、口腔健康、功能和容貌外觀以及心理健康。正畸矯治的病患隨著生活水平的增加也逐年增多。正畸固定矯治中,很多患者在矯治過程中會出現(xiàn)牙齒表面釉質脫礦的現(xiàn)象。有研究顯示,牙齒表面釉質在固定正畸矯治過程的脫礦率大約為2-97%[2,3]。這些現(xiàn)象可能與正畸矯治器的粘接有關,因為在固定矯治過程中牙齒上需要粘接托槽、帶環(huán)等矯治附件,這些附件可能會使牙齒表面清潔受限、軟垢滯留,從而影響口腔健康。但是在臨床治療過程中我們也經常發(fā)現(xiàn),有些正畸固定矯治的患者雖然在矯治過程中軟垢很多、口腔衛(wèi)生很差,而且矯治時間較長,牙面也未出現(xiàn)明顯的脫礦現(xiàn)象[11]。那么在固定正畸矯治過程中的釉質脫礦的原因是什么呢?本研究從微生物學方面對正畸患者佩戴矯治器前后進行菌群測定,分析正畸患者在固定正畸矯治前后口腔菌群的變化及其與口腔健康的關系。研究目的:探討正畸固定矯治前后患者口內菌群的變化;將患者口腔菌群的變化與患者口腔健康相聯(lián)系研究兩者之間的相關性。研究方法:從2013年8月-2014患者中隨機選取口內牙齒沒有明顯脫礦患者20名,于正畸矯治前刮取其上頜前牙牙區(qū)菌斑,分為未治療組組;選取正畸治療超過六個月并且前牙未出現(xiàn)明顯脫礦且口腔健康狀況良好患者20名,取同樣區(qū)域菌斑為正畸治療組。年8月間在山東大學口腔醫(yī)院正畸科正在進行固定正畸矯治。取牙面菌斑樣本,菌斑基因組DNA提取后PCR擴增,最后對擴增子進行測序和分析,檢測正畸前后口內菌群的變化情況。結果:研究結果顯示來自正畸治療組的菌斑多樣性與未治療組沒有明顯差異(P>0.05)。實驗測得口腔內約有238個不同的細菌菌屬與維持口腔微生態(tài)平衡有關。其中10個屬的細菌含量較高,占整個口腔的70%,分別是Parascardovia,Rothia,Corynebacterium,Leptotrichia,us,Selenomonas,Prevotella,Capnocytophaga,Hylemonella。通過將正畸前后牙面菌斑比較,我們發(fā)現(xiàn)有6個屬的細菌存在差異。6個屬的細菌包括在Parascardovia,Leptotrichia,Corynebacterium,us,Selenomonas,以及Prevotella。我們的實驗結果表明,正畸治療前后菌群結構存在一定的差異性,多種菌屬與齲病的發(fā)生可能存在正相關或負相關關系,而這種菌屬的改變在臨床并未引起相應口腔健康的改變,我們可以認為在正畸治療以后口腔內微生物菌群建立了一個新的穩(wěn)定生物體系。結論:患者戴用固定矯治器后,us,Corynebacterium,Leptotrichia,Antinomycetes,以及Lactobacillus總菌群中含量明顯增高的情況。本研究結果提示,患者戴用正畸固定矯治器后,局部牙面菌斑中的菌群構成發(fā)生改變,并且進入一種新的穩(wěn)定平衡狀態(tài)。關鍵詞:固定正畸治療16SrDNA菌屬含量前言臨床上正畸患者的口腔衛(wèi)生的保持一直是比較難以維持的。在臨床上我們就經常發(fā)現(xiàn)許多固定正畸矯治的患者在矯治過程就發(fā)生了牙面脫礦的現(xiàn)象。顯然這與牙面菌斑在固定正畸矯治的附件周圍聚集有一定的關系[4,5]�？赡苁且驗樵谡委熯^程中會出現(xiàn)口內菌群的紊亂,牙周治病菌以及致齲菌比例增多的現(xiàn)象,從而導致牙周炎以及釉質脫礦的發(fā)生。有研究顯示,固定矯治過程中發(fā)生釉質脫礦的概率大約為2-97%[2,3],其主要表現(xiàn)為脫礦牙釉質表面光澤度下降呈白堊色,影響美觀,嚴重者可導致齲的發(fā)生[4]。也有調查顯示固定矯治器粘接6個月內脫礦的發(fā)生率明顯增加,6-12個月間脫礦發(fā)生率也會有所上升[1]。另一方面在臨床治療過程中也經常發(fā)現(xiàn),有些接受正畸固定矯治的患者即使在矯治過程中軟垢很多、口腔衛(wèi)生很差,同時矯治時間較長,牙面也未出現(xiàn)明顯的脫礦現(xiàn)象以及牙周疾病,在這種情況下口腔內菌群又發(fā)生了什么樣的變化?本實驗使用16SrDNA測序的方法,分析口腔菌群在正畸前后發(fā)生的變化。16SrRNA位于原核細胞核糖體小亞基上,包括10個保守區(qū)域和9個高變區(qū)域,保守區(qū)在細菌種屬之間沒有很大的差距,而高變區(qū)域在細菌種屬之間有明顯的差異。因此,16SrDNA可以做作為分別生物物種的特征核酸序列,已經被廣發(fā)認為是可以較快且準確分析細菌系統(tǒng)和分類鑒定的指標。以往454測序平臺以讀長優(yōu)勢廣泛應用于16SrDNA測序領域,但是隨著MiSeq平臺雙端PE250和PE300測序策略的發(fā)展,讀長不斷增長,使得基于MiSeq測序研究物種多樣性的準確性大幅度提高[7],所以已經成為研究微生物群落多樣性的首選之策[8,9]。根據所擴增的16S區(qū)域特點,基于IlluminaMiSeq測序平臺,利用雙末端測序(Paired-End)的方法,構建小片段文庫進行雙末端測序。通過對Reads拼接過濾,OTUs(OperationalTaxonomicUnits)聚類,并進行物種注釋及豐度分析,可以揭示樣品物種構成;進一步的α多樣性分析(AlphaDiversity),β多樣性分析(BetaDiversity)可以分析樣品之間的差異。本研究從微生物學方面應用16SrDNA測序的方法對正畸患者佩戴矯治器前后進行菌群測定,分析在正畸固定矯治前后患者口內菌群的差異及其影響。材料與方法1.實驗材料1.1實驗試劑(1)PBS緩沖液(上海研域試劑有限公司)(2)Phusion?High-FidelityPCRMasterMix(NewEnglandBiolabs公司)(3)GC緩沖液(NewEnglandBiolabs公司)(4)DNA純化回收試劑盒(北京天根生化科技有限公司)(5)藍白斑篩選試劑(上海生工生物工程有限公司)(6)胰蛋白胨、酵母提取物、瓊脂粉(上海生工生物工程有限公司)(7)Eppendorf管(海門市盛邦實驗器材有限公司)1.2主要儀器設備(1)DL—CJ—IN型高性能超凈工作臺(哈爾濱市東聯(lián)電子技術公司)(2)MLS—3750型高壓滅菌器(日本SANYO公司)(3)MDF一382E型超低溫冰箱(日本SANYO公司)(4)TGL_16G型高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)(5)ND一2000C型微量紫外分光光度計(美國NanoDrop公司)(6)PowerPac3000型Bio—rad電泳儀(美國BIO.RAD公司)(7)170—4406型小型水平電泳槽(美國BIO.RAD公司)(8)GelDoc2000型凝膠成像系統(tǒng)(美國BIO.RAD公司)(9)LightCycler480Real—TimePCR儀(瑞士Roche公司)(10)微量移液器(德國Eppendoff公司)(11)生物安全柜(哈爾濱市東聯(lián)電子技術開發(fā)有限公司)(12)梯度PCR儀(德國Biometra公司)2.實驗方法2.1研究對象2.1.1研究對象的選擇從2013年8月-2014患者中隨機選取口內牙齒沒有明顯脫礦患者20名,于正畸矯治前刮取其上頜前牙牙區(qū)菌斑,分為未治療組組;選取正畸治療超過六個月并

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