本文關(guān)鍵詞：純鈦表面載LAMA3涂層在種植體—牙齦生物學(xué)封閉形成中的作用　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：種植義齒要在口腔環(huán)境中獲得長期的穩(wěn)定,不僅需要穩(wěn)固的種植體-骨結(jié)合,種植體-牙齦上皮結(jié)合界面作為生物屏障在抵御病原體入侵中也極為重要。與天然牙-結(jié)合上皮界面相似,種植體周圍上皮主要依靠內(nèi)基板和半橋粒附著在種植體表面。然而,種植體與牙齦的結(jié)合較為薄弱,上皮的附著僅局限在根方1/3。內(nèi)基板中的重要組份為laminin 332,其中的α3鏈在細(xì)胞行為的調(diào)控以及半橋粒的形成中起重要作用。本研究通過在種植體表面構(gòu)建載LAMA3基因的生物涂層,利用體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行生物學(xué)評(píng)價(jià),并探討該涂層在種植體周圍上皮附著形成中的作用及機(jī)制。本研究中首先利用層層自組裝技術(shù)在純鈦表面制備由殼聚糖(CS)、透明質(zhì)酸(HA)和IV型膠原(COL)組裝的生物涂層,通過掃描電鏡(SEM)、原子力顯微鏡(AFM)、X射線光電子能譜(XPS)和接觸角測試儀對(duì)不同組裝層數(shù)以及交聯(lián)前后的涂層進(jìn)行檢測,并評(píng)估各組樣品對(duì)上皮細(xì)胞活性的影響。綜合表面形貌以及XPS的檢測結(jié)果,表明CS/(HA/COL)n多層膜組裝至5層時(shí)經(jīng)化學(xué)交聯(lián)后的涂層較為穩(wěn)定,因此選取5層作為后續(xù)研究中的組裝層數(shù)。細(xì)胞活性檢測結(jié)果也表明CS/(HA/COL)n涂層在化學(xué)交聯(lián)前后都具有良好的細(xì)胞相容性。在構(gòu)建完成CS/(HA/COL)5涂層的基礎(chǔ)上,將抗腺病毒抗體偶聯(lián)至涂層表面,利用抗原-抗體的特異性結(jié)合將載LAMA3重組腺病毒固定在CS/(HA/COL)5涂層上,從而實(shí)現(xiàn)純鈦表面LAMA3基因原位轉(zhuǎn)染體系的構(gòu)建。通過條件優(yōu)化,偶聯(lián)抗體的最佳濃度為30μg/孔,每個(gè)樣品腺病毒使用量為1×108PFU。然后利用人永生化表皮細(xì)胞HaCaT對(duì)純鈦表面載LAMA3基因涂層進(jìn)行細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明該涂層有利于上皮細(xì)胞的早期粘附和伸展,能有效提高lamininα3的表達(dá),并能誘導(dǎo)結(jié)合界面成熟半橋粒結(jié)構(gòu)的形成。最后通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn),利用免疫組織形態(tài)學(xué)、透射電鏡觀察和辣根過氧化物酶(HRP)浸潤性檢測等研究純鈦表面載LAMA3涂層在種植體-牙齦生物學(xué)封閉形成中的作用。結(jié)果表明該涂層在創(chuàng)傷早期可以有效提高種植體周圍上皮laminin a3的表達(dá),加快種植體周圍上皮的形成,促進(jìn)種植體-牙齦結(jié)合界面半橋粒的整合,相比于光滑表面種植體組可以明顯減少HRP在種植體周圍牙齦組織中的浸潤。本研究在純鈦表面構(gòu)建載LAMA3基因的生物涂層,能有效實(shí)現(xiàn)種植體表面原位基因轉(zhuǎn)染,提高上皮細(xì)胞中l(wèi)aminin a3鏈的表達(dá)。體內(nèi)、外的研究均表明該涂層有利于上皮細(xì)胞的早期粘附和伸展,促進(jìn)結(jié)合界面上半橋粒結(jié)構(gòu)的形成,并有效改善種植體-牙齦上皮的生物學(xué)封閉。本文為促進(jìn)種植體周圍上皮附著形成和改善種植體-牙齦生物學(xué)封閉的研究提供了新的思路以及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:To achieve long-term stability of implant denture in the oral environment, not only need to implant bone solid combination implant gingival epithelial interface as a biological barrier against the pathogens that invade are also extremely important. With natural teeth with epithelial interface are similar, around the implant on the skin mainly depends on the substrate and in hemidesmosome attachment on the surface of implant. However, combination of implant and gingival epithelial attachment is relatively weak, only in the root 1/3. in the substrate in an important component for the laminin 332, the alpha 3 chain in the regulation of cell behavior and hemidesmosome formation plays an important role. This study constructed by in vivo biological the coating, carrying LAMA3 gene on implant surface, biological evaluation in vitro, and to investigate the effect and mechanism of adhesion formation in the coating in the epithelium around the implant. This study firstly by LBL In the surface of pure titanium was prepared by chitosan (CS), hyaluronic acid (HA) and type IV collagen (COL) biological coating assembly, by scanning electron microscopy (SEM), atomic force microscopy (AFM), X ray photoelectron spectroscopy (XPS) and contact angle tester for detection of different coatings the number of the layers and before and after crosslinking, and evaluate the influence of each sample on the epithelial cell activity. Surface morphology and XPS detection results, showed that CS/ (HA/COL) n multilayer assembly to 5 layer coating by chemical crosslinking in the relatively stable, so as to select 5 layer assembly layers in the follow-up research. Cell activity the test results also show that the CS/ (HA/COL) n coatings have good biocompatibility in chemical crosslinking. Before and after in the construction of CS/ (HA/COL) based on the 5 coating, the surface of anti adenovirus antibody coupled to the coating, the use of specific antigen antibody binding to LAMA3 recombinant adenovirus Fixed in CS/ (HA/COL) 5 coating, so as to realize the construction of LAMA3 pure titanium surface in situ gene transfection system. By optimizing the conditions, the optimal concentration of antibody coupled with 30 g/ holes, each sample of adenovirus usage was 1 * 108PFU. and then use the immortalized human epidermal cells of HaCaT on the surface of pure titanium coating containing LAMA3 gene cytological evaluation. The results show that the coating is conducive to early adhesion of epithelial cells and stretch, can effectively improve the laminin alpha 3 expression, and can induce the interface formed by the combination of mature hemidesmosome structure. Finally, in vivo, using immunohistochemical morphology, transmission electron microscopy and horseradish peroxidase (HRP) invasive detection etc. study on the surface of pure titanium LAMA3 coating on the implant gingival biology closed formation. The results show that the coating can effectively improve the expression of peri implant epithelium laminin A3 in the early stage of trauma, Accelerate the formation of peri implant epithelium, promote implant junctional interface integration hemidesmosomes, compared to the smooth surface of the implant group can significantly reduce HRP infiltration in gingival tissue around the implants. The establishment of biocoatings carrying LAMA3 gene on the surface of pure titanium implant surface can effectively achieve the in situ gene transfection to improve the expression of laminin, A3 chain in epithelial cells. In vivo, the results show that the coating is conducive to the early adhesion of epithelial cells and stretch, promoting the combination of hemidesmosomes structure on the interface, and effectively improve the closed biological implant gingival epithelium. In order to promote implant epithelial attachment formation and improvement research body - gum biology closed planter provides ideas and new experimental evidence.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.6

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