本文關(guān)鍵詞：機械壓應(yīng)力環(huán)境中sclerostin對成牙骨質(zhì)細胞功能調(diào)節(jié)機制的研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：在正畸治療過程中,即使是輕力,也會出現(xiàn)牙根的吸收與修復(fù),當(dāng)吸收與修復(fù)平衡打破后常常會出現(xiàn)“正畸導(dǎo)致的炎性牙根吸收(orthodontically induced inflammatory rootresorption,OIIRR)”這一副作用。但目前仍未找到有效預(yù)防和修復(fù)OIIRR的措施,究其原因是因為人類對其發(fā)生機制認識不足。研究發(fā)現(xiàn)正畸加力后,牙根牙骨質(zhì)在出現(xiàn)不同程度吸收和修復(fù)的同時伴有成牙骨質(zhì)細胞的功能活躍。說明在受力情況下,成牙骨質(zhì)細胞對牙骨質(zhì)再生的各種信號傳導(dǎo)有重要意義。在正畸力條件下成牙骨質(zhì)細胞的生物學(xué)功能受多種因子的影響。骨硬化蛋白(sclerostin)是wnt/β-catenin信號通路的天然抑制劑,可抑制由成骨細胞介導(dǎo)的骨形成作用[1]。研究認為成骨細胞中BMP2通過上調(diào)骨硬化蛋白和DKK1的表達,從而抑制Wnt信號,降低骨量的形成[2]。骨硬化蛋白還受到機械刺激的調(diào)控,在成熟的成骨細胞中有高表達,機械加載可短暫的降低骨硬化蛋白及基因的表達[3]。成牙骨質(zhì)細胞與成骨細胞在形態(tài)上比較相似,但其生物學(xué)功能有根本的區(qū)別。本實驗?zāi)康脑谟谘芯吭跈C械壓應(yīng)力作用下骨硬化蛋白對成牙骨質(zhì)細胞生物學(xué)功能調(diào)節(jié)及可能相關(guān)機制。實驗分為三個部分:1.機械壓應(yīng)力刺激條件下成牙骨質(zhì)細胞OCCM-30中骨硬化蛋白的時效性表達目的:探究機械壓力環(huán)境下occm-30中骨硬化蛋白的時效性表達,為后期實驗選擇機械加力的時間點。方法:用大小為2000μstrain,頻率為0.5hz的單軸壓應(yīng)力對occm-30細胞加力;加力時間分別為(3h,6h,12h,24h),每個時間點設(shè)置加力組和非加力組。用wb檢測手段檢測骨硬化蛋白的蛋白(sclerostin)表達水平,用rt-pcr的方法檢測骨硬化蛋白的基因(sostmrna)水平。結(jié)果:在各組中均檢測到骨硬化蛋白的存在,與未加力組比較3h組和6h組加力后骨硬化蛋白的表達均上調(diào),12h組和24h組則未見明顯差異。結(jié)論:成牙骨質(zhì)細胞中有內(nèi)源性骨硬化蛋白的存在,機械壓應(yīng)力刺激可增強骨硬化蛋白的表達。2.機械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對wnt/β-catenin信號通路及bmp/smad通路的調(diào)控目的:研究機械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對牙骨質(zhì)形成相關(guān)wnt/β-catenin信號通路bmp/samd通路的調(diào)控方法:用含有不同濃度骨硬化蛋白的培養(yǎng)基(0ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml)培養(yǎng)細胞,再用大小為2000μstrain,頻率為0.5hz的單軸壓應(yīng)力加力6h,以未加力未加骨硬化蛋白培養(yǎng)的細胞為對照組,wb檢測β-catenin,p-smad1/5/8,smad1/5/8的蛋白水平。結(jié)果:骨硬化蛋白濃度為0ng/ml時加力組的p-smad1/5/8表達高于非加力組,隨著sclerostin濃度的增加p-smad1/5/8的表達呈現(xiàn)出明顯的下調(diào)趨勢。而β-catenin和smad1/5/8未顯示出明顯的差異性。結(jié)論:機械壓力環(huán)境下,骨硬化蛋白增加可下調(diào)BMP/smad通路的表達,對β-catenin的蛋白表達無影響。3.機械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對OCCM-30成牙骨質(zhì)相關(guān)因子的影響目的:研究機械壓應(yīng)力環(huán)境中骨硬化蛋白對OCCM-30成牙骨質(zhì)相關(guān)因子的影響方法:用含有不同濃度骨硬化蛋白的培養(yǎng)基(0ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml)培養(yǎng)細胞,再用大小為2000μstrain,頻率為0.5Hz的單軸壓應(yīng)力加力6h,以未加力未加骨硬化蛋白培養(yǎng)的細胞為對照組,用RT-PCR的方法檢測Runx-2,OCN,BSP,RANKL,OPG的表達,ALP活性檢測法檢測ALP活性結(jié)果:與不加力組比較,加力后Runx-2的表達下調(diào);在加力條件下sclerostin濃度增加時Runx-2的表達也呈現(xiàn)下調(diào)趨勢,BSP和OCN的表達與Runx-2相類似。RANKL和OPG的表達:與未加力組比較,加力組RANKL的表達上調(diào),而OPG的表達下調(diào);隨著骨硬化蛋白濃度的增加,RANKL的表達繼續(xù)增加,OPG的表達繼續(xù)下調(diào)。機械壓應(yīng)力作用下ALP的活性增加,隨著骨硬化蛋白濃度的增加,ALP的活性呈現(xiàn)出遞減的趨勢。結(jié)論:機械壓應(yīng)力的刺激作用下骨硬化蛋白對與成牙骨質(zhì)細胞的礦化作用也是抑制的,且可能是通過BMP信號通路抑制成骨因子Runx2、OCN、BSP等的表達,促進破牙骨質(zhì)相關(guān)因子RANKL/OPG的比值實現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5

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本文編號：1351418