本文關(guān)鍵詞：NR1在嗎啡精神依賴大鼠相關(guān)腦區(qū)中的表達(dá)及左旋延胡索乙素的干預(yù)作用

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【摘要】：目的:觀察嗎啡誘導(dǎo)條件性位置偏愛(Conditioned Place Preference,CPP)大鼠在CPP獲得與消退不同階段腦獎(jiǎng)賞神經(jīng)環(huán)路中腦腹側(cè)被蓋區(qū)-伏核-前額葉皮質(zhì)(VTA-NAc-PFC),以及嗎啡耐受細(xì)胞中N-甲基-D-天冬氨酸受體亞基NR1的表達(dá)變化,從組織和細(xì)胞水平揭示NR1在嗎啡誘導(dǎo)精神依賴中的作用;并在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,觀察用左旋延胡索乙素(l-THP)治療后,對(duì)大鼠嗎啡CPP效應(yīng)以及NAc核團(tuán)中NR1表達(dá)變化的影響,為l-THP治療阿片類依賴的應(yīng)用補(bǔ)充新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、大鼠嗎啡CPP獲得階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達(dá)篩選出合格的SD大鼠,隨機(jī)分成生理鹽水(NS)對(duì)照組和嗎啡CPP模型組,對(duì)各組大鼠采用劑量遞增法(嗎啡起始劑量從d1的10 mg/kg至d10的100 mg/kg)分別進(jìn)行頸背部皮下注射生理鹽水和嗎啡,每次注射20 min后置黑、白箱中進(jìn)行訓(xùn)練(白箱為嗎啡伴藥箱),連續(xù)注射10 d。在末次訓(xùn)練48 h后進(jìn)行CPP測試,確認(rèn)大鼠嗎啡CPP模型建立成功后,立即將各組大鼠處死并取材(VTA、NAc、PFC),分別采用PCR和Western blot技術(shù)檢測其NR1的表達(dá)變化。2、大鼠嗎啡CPP消退階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達(dá)變化利用上述方法建立大鼠嗎啡CPP模型后,分別將NS對(duì)照組和嗎啡CPP組大鼠自然放置28天進(jìn)行CPP檢測,確定大鼠嗎啡CPP效應(yīng)消失,立即將兩組大鼠處死并取材(VTA、NAc、PFC),分別采用PCR和Western blot技術(shù)檢測其NR1的表達(dá)變化。3、嗎啡耐受神經(jīng)元細(xì)胞中NR1的表達(dá)變化培養(yǎng)皮層神經(jīng)元細(xì)胞,設(shè)置NS對(duì)照組和嗎啡實(shí)驗(yàn)組,分別加入NS及10μmol/l嗎啡,48 h后分別收集細(xì)胞,提取蛋白質(zhì),采用Western blot方法檢測其細(xì)胞中NR1的表達(dá)。4、l-THP治療對(duì)大鼠嗎啡CPP效應(yīng)和NAc腦區(qū)中NR1表達(dá)的影響利用上述方法在建立大鼠嗎啡CPP模型的基礎(chǔ)上,將大鼠分成6組:NS對(duì)照組、嗎啡CPP組、NS治療組、l-THP低、中、高劑量治療組。在確認(rèn)大鼠嗎啡CPP模型建立成功后,對(duì)NS對(duì)照組和嗎啡CPP組大鼠立即處死并取材;剩余4組大鼠,除NS治療組灌胃用NS外,其他l-THP低、中、高劑量治療組大鼠則分別給予l-THP 0.94mg/kg、1.88 mg/kg和3.76 mg/kg進(jìn)行灌胃治療,持續(xù)治療6 d再次檢測CPP后即刻處死并取NAc腦組織。采用Western blot技術(shù)檢測其在NAc腦區(qū)中NR1的表達(dá)。結(jié)果:1、大鼠嗎啡CPP獲得階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達(dá)在嗎啡注射末次訓(xùn)練48 h后,經(jīng)過CPP測試,NS對(duì)照組大鼠在白箱停留的時(shí)間在訓(xùn)練前后無明顯差異(訓(xùn)練前393±81 s、訓(xùn)練后為416±58 s)。嗎啡CPP組大鼠訓(xùn)練后與訓(xùn)練前比較,訓(xùn)練后在白箱中的停留時(shí)間明顯延長(訓(xùn)練前408±93 s、訓(xùn)練后528±81 s)(P0.01)。同時(shí)嗎啡CPP組與NS對(duì)照組比較,CPP模型組大鼠訓(xùn)練后在白箱中停留時(shí)間明顯延長(P0.01)。嗎啡CPP組與NS對(duì)照組比較,大鼠NAc中NR1 m RNA表達(dá)水平較NS對(duì)照組顯著增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而大鼠嗎啡CPP組VTA和PFC的NR1 m RNA水平較NS對(duì)照組雖有增加但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。對(duì)于NR1的蛋白表達(dá),大鼠嗎啡CPP組NAc中NR1蛋白表達(dá)較NS對(duì)照組顯著增加(P0.01),而VTA和PFC腦區(qū)的NR1蛋白水平在兩組之間比較同樣增加,但同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、大鼠CPP消退階段VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路各腦區(qū)NR1的表達(dá)在大鼠嗎啡CPP建立成功并自然消退28d進(jìn)行CPP檢測:生理鹽水對(duì)照組大鼠在白箱中停留的時(shí)間為410±69 s,嗎啡誘導(dǎo)的CPP組大鼠在白箱中停留的時(shí)間為396±117 s,兩組大鼠白箱停留時(shí)間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);兩組大鼠VTA、NAc、PFC各腦區(qū)NR1 m RNA以及蛋白表達(dá)水平之間比較亦無顯著性差異(P0.05)。3、嗎啡耐受細(xì)胞中NR1的表達(dá)變化在嗎啡加入神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)后48 h,與生理鹽水對(duì)照組比較,嗎啡實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中NR1的蛋白表達(dá)水平顯著增加(P0.01)。4、l-THP治療對(duì)大鼠嗎啡CPP效應(yīng)及NAc腦區(qū)中NR1表達(dá)的影響在末次訓(xùn)練48 h后,NS對(duì)照組大鼠訓(xùn)練前后在白箱中的停留時(shí)間分別為383±62s和401±76 s;嗎啡CPP組為407±83 s和528±40 s;NS治療組為386±75 s和527±55 s,治療6天后為524±79 s;l-THP低劑量治療組訓(xùn)練前后分別為396±81 s和523±32 s,治療6天后為519±47 s;l-THP中劑量治療組訓(xùn)練前后分別為389±95 s和528±42 s,治療6天后為386±76 s;l-THP高劑量治療組訓(xùn)練前后分別為399±65 s和536±67 s,治療6天后為386±88 s。與NS對(duì)照組比較,大鼠嗎啡CPP模型組、NS治療組、l-THP低、中、高劑量治療5個(gè)組大鼠在白箱中停留時(shí)間明顯增加(均P0.01);經(jīng)不同濃度的l-THP治療6 d后,與NS治療組比較,l-THP中、高劑量治療組大鼠在白箱的停留時(shí)間減少(均P0.01)。與NS治療組比較,l-THP中、高劑量治療組大鼠NAc中NR1蛋白含量明顯降低(P0.05)。結(jié)論:1.NR1 m RNA和蛋白在大鼠嗎啡CPP獲得階段NAc腦區(qū)表達(dá)增加,而在嗎啡CPP消退階段均恢復(fù)到對(duì)照組水平,結(jié)合在嗎啡處理神經(jīng)元細(xì)胞中NR1蛋白表達(dá)的增多,提示NR1表達(dá)的改變?cè)趩岱染褚蕾囆纬芍邪l(fā)揮有一定的作用,可能是嗎啡精神依賴形成的機(jī)制之一;2.l-THP通過逆轉(zhuǎn)NAc腦區(qū)中NR1蛋白的異常表達(dá),可能是加速嗎啡CPP效應(yīng)消退的又一藥理作用機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：嗎啡 伏核 NR1 精神依賴 左旋延胡索乙素
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.61
【目錄】：

• 中英縮略詞對(duì)照表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 1 材料與方法15-23
• 2 結(jié)果23-29
• 3 討論29-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述：NMDA受體在阿片類精神依賴中作用35-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 致謝42-43
• 作者簡介43

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：587909