目的： 1.選擇合適的葡萄糖與皮質(zhì)酮干預(yù)濃度,建立DD細(xì)胞模型,從細(xì)胞功能形態(tài)學(xué)、葡萄糖消耗量、單胺遞質(zhì)及神經(jīng)再生相關(guān)指標(biāo)等不同維度確立模型評價(jià)體系,為DD的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。 2.以所建DD模型細(xì)胞為研究對象,給予中藥復(fù)方左歸降糖解郁方干預(yù),明確其降糖和抗抑郁作用,并初探其治療DD的作用機(jī)理,為DD的防治提供新思路和新方法。 方法： 1.DD細(xì)胞模型的建立。(1)DD細(xì)胞模型誘導(dǎo)劑的選擇。離體培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞7d,按誘導(dǎo)劑濃度不同隨機(jī)分為9組。通過細(xì)胞存活率選擇最佳的葡萄糖與皮質(zhì)酮干預(yù)濃度組合。(2)DD細(xì)胞模型的建立。按照(1)獲得的誘導(dǎo)劑最佳濃度組合,建立DD細(xì)胞模型。按誘導(dǎo)劑隨機(jī)分為4組：正常組(不做任何處理)；葡萄糖組(75mM/L葡萄糖干預(yù))；皮質(zhì)酮組(100-/L皮質(zhì)酮干預(yù))；葡萄糖聯(lián)合皮質(zhì)酮組(75mM/L葡萄糖聯(lián)合100μM/L皮質(zhì)酮干預(yù))。誘導(dǎo)劑干預(yù)24h后,①功能形態(tài)學(xué)評價(jià)：神經(jīng)細(xì)胞鑒定, MTT測定細(xì)胞存活率,TUNEL染色測定凋亡小體；②葡萄糖消耗量：葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)法檢測海馬神經(jīng)元細(xì)胞葡萄糖消耗值；③單胺遞質(zhì)：ELISA法測定...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 糖尿病并發(fā)抑郁癥細(xì)胞模型的建立
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及溶液
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 物品準(zhǔn)備
            2.1.2 L-多聚賴氨酸包被培養(yǎng)板
            2.1.3 取材前準(zhǔn)備工作
            2.1.4 胎鼠海馬組織提取、海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離和培養(yǎng)
        2.2 DD誘導(dǎo)劑的選擇
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 DD細(xì)胞模型的建立
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.4 指標(biāo)檢測
            2.4.1 原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)與功能檢測
                2.4.1.1 神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查
                2.4.1.2 神經(jīng)細(xì)胞鑒定
                2.4.1.3 MTT比色法檢測神經(jīng)細(xì)胞存活率
                2.4.1.4 HE染色
                2.4.1.5 TUNEL染色法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡率
            2.4.2 葡萄糖消耗量檢測
            2.4.3 神經(jīng)遞質(zhì)檢測
            2.4.4 CREB、BDNF含量檢測
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 DD誘導(dǎo)劑的選擇
            3.1.1 海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)與功能檢測
                3.1.1.1 神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查
                3.1.1.2 神經(jīng)元細(xì)胞鑒定
                3.1.1.3 MTT法檢測神經(jīng)細(xì)胞存活率
        3.2 DD細(xì)胞模型的建立
            3.2.1 原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)與功能檢測
                3.2.1.1 神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查
                3.2.1.2 神經(jīng)細(xì)胞鑒定
                3.2.1.3 MTT法檢測神經(jīng)細(xì)胞存活率
                3.2.1.4 HE染色
                3.2.1.5 TUNEL染色
            3.2.2 葡萄糖消耗量檢測
            3.2.3 神經(jīng)遞質(zhì)DA、NE、5-HT含量檢測
            3.2.4 BDNF、CREB含量檢測
    4 討論
        4.1 DD細(xì)胞建模方法的選擇
        4.2 DD細(xì)胞模型評價(jià)指標(biāo)的確立
            4.2.1 糖尿病樣指標(biāo)評價(jià)
            4.2.2 抑郁樣指標(biāo)評價(jià)
        4.3 DD細(xì)胞模型與單純糖尿病細(xì)胞模型、抑郁癥細(xì)胞模型的區(qū)別
第二部分 左歸降糖解郁方對糖尿病并發(fā)抑郁癥模型細(xì)胞的保護(hù)作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及溶液
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 左歸降糖解郁方對糖尿病并發(fā)抑郁癥模型細(xì)胞的保護(hù)作用研究
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 指標(biāo)檢測
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)與功能檢測
            3.1.1 神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查
            3.1.2 神經(jīng)元細(xì)胞鑒定
            3.1.3 MTT法檢測神經(jīng)細(xì)胞存活率
            3.1.4 HE染色
            3.1.5 TUNEL染色
        3.2 葡萄糖消耗量檢測
        3.3 神經(jīng)遞質(zhì)DA、NE、5-HT含量檢測
        3.4 BDNF、CREB含量檢測
        3.5 NR2A、NR2B含量檢測
    4 討論
        4.1 左歸降糖解郁方的組方原則及藥物配伍意義
        4.2 左歸降糖解郁方對DD模型細(xì)胞的保護(hù)作用
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    綜述
        參考文獻(xiàn)
    攻讀碩士期間發(fā)表的論文
    攻讀碩士期間參與的課題



本文編號：3935380