本研究通過建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SHSY5Y)體外模擬缺血再灌(imitative ischemia-reperfusion)模型,探討神經(jīng)細(xì)胞凋亡的途徑及褪黑素(melatonin,MT)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抗氧化、抗凋亡的作用機制,為缺血再灌注誘導(dǎo)腦神經(jīng)元凋亡的基礎(chǔ)性研究和臨床有效防治老年(血管)性癡呆(Vascular dementia,VD)提供新的理論依據(jù)。 體外常規(guī)培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SHSY5Y,然后模擬缺血再灌注培養(yǎng)(先缺糖缺氧,后正常培養(yǎng))建立細(xì)胞模型;實驗分正常對照組、缺氧再灌組及MT/NAC藥物組;瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞儀和透射電鏡檢測細(xì)胞凋亡情況;MTT法檢測細(xì)胞生存活力;熒光比色法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生;HLPC檢測興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(Glutamate,Glu)的釋放;分光光度法檢測Caspase-3活性和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;western blotting及ELISA法檢測細(xì)胞色素C(cytochrom...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
參考文獻(xiàn)
材料方法
    一、主要試劑和材料
    二、主要儀器和器材
    三、方法
結(jié)果
    1、瓊脂糖凝膠電泳對凋亡神經(jīng)元檢測及MT/NAC的保護(hù)作用
    2、流式細(xì)胞儀對凋亡神經(jīng)元檢測及MT/NAC的保護(hù)作用
    3、透射電鏡對凋亡細(xì)胞的檢測
    4、模擬缺血再灌注致細(xì)胞生存能力下降及MT/NAC的保護(hù)作用
    5、模擬缺血再灌注對乳酸脫氫酶影響及MT/NAC的保護(hù)作用
    6、缺血再灌注誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞釋放Glu類神經(jīng)遞質(zhì)及MT/NAC的保護(hù)作用
    7、模擬缺血再灌注誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS升高及MT/NAC的抗氧化作用
    8、模擬缺血再灌注誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放及MT/NAC的抑制作用
    9、模擬缺血再灌注誘導(dǎo)Csapase-3的釋放及MT/NAC的抑制作用
    10、模擬缺血再灌注誘導(dǎo)線粒體跨膜電位的改變及MT/NAC的穩(wěn)定作用
討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    一、缺血再灌注誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑
    二、線粒體途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響因素
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文
致謝



本文編號：3813252