【摘要】： 目的:1.通過OVX結(jié)合注射D-gal建立復(fù)合因素AD動(dòng)物模型,闡明雌激素剝奪和氧化應(yīng)激在AD發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用;2.研究與探索星形膠質(zhì)細(xì)胞參與此AD模型的發(fā)病過程及機(jī)制。 方法:1.3月齡雌性SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(C)、OVX結(jié)合注射D-gal模型組(O+D)、單純OVX組(O)、單純注射D-gal組(D)和17-β雌二醇替代治療組(O+D+E),6周后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定、基底前腦膽堿能神經(jīng)元ChAT免疫組化染色、海馬區(qū)Aβ免疫組化染色、海馬及皮質(zhì)電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察和脂褐素與突觸的定量分析來驗(yàn)證此模型。2.應(yīng)用此模型(O+D),以2周和6周為觀察時(shí)間點(diǎn),通過海馬區(qū)GFAP的免疫組化染色和western-blotting檢測(cè)、GSH的生化檢測(cè)、AChE組織化學(xué)染色與光密度分析及AChE活性測(cè)定、突觸和血-腦屏障周圍超微結(jié)構(gòu)觀察以及HRP通透性實(shí)驗(yàn)來研究星形膠質(zhì)細(xì)胞在此模型中的病理改變與功能障礙。 結(jié)果:1.與C組相比,O+D組、O+D+E組、D組、O組均出現(xiàn)不同程度的行為學(xué)和病理學(xué)損害,以O(shè)+D組損害最為明顯,具體表現(xiàn)為:(1)開場實(shí)驗(yàn)中,穿越格數(shù)明顯減少;Y型迷宮達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試次數(shù)增多;跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中,錯(cuò)誤次數(shù)增加、潛伏期縮短。(2)在MS、NDB區(qū)域的ChAT免疫陽性膽堿能神經(jīng)元明顯減少,染色變淺,突起變短。(3)在海馬的齒狀回、CA1和下托觀察到了其他組沒有出現(xiàn)的細(xì)胞內(nèi)Aβ沉積。(4)超微結(jié)構(gòu)損害:細(xì)胞核變形扭曲;核內(nèi)染色質(zhì)聚集成不規(guī)則的高電子密度的塊狀;核膜破裂、不完整;胞漿內(nèi)含有大量脂褐素、次級(jí)溶酶體;線粒體出現(xiàn)腫脹扭曲、變形,嵴斷裂、空泡樣變;細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)類似NFT改變;大量變性的突觸結(jié)構(gòu)。脂褐素?cái)?shù)量明顯增加,突觸數(shù)量明顯減少。2.(1)與C組和2w O+D組相比,6w O+D組大鼠在水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中,到達(dá)平臺(tái)的潛伏期明顯延長;穿越平臺(tái)次數(shù)和在目標(biāo)象限時(shí)間明顯減少,而C組與2wO+D組大鼠之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)與C組和2w O+D組大鼠相比,6w O+D組大鼠在海馬區(qū)出現(xiàn)了明顯的膽堿能纖維終末的密度下降與AChE活性降低,而C組與2w O+D組大鼠之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)與C組相比,2w與6w O+D組大鼠海馬區(qū)GFAP水平明顯增加,但兩組間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)與C組和2w O+D組相比,6w O+D組出現(xiàn)了明顯的GSH水平的降低。而2w O+D組則觀察到了GSH水平的輕度升高,但與C組相比并沒有明顯的差異。(5)在2w和6wO+D組大鼠海馬區(qū)出現(xiàn)了廣泛的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化。與C組靜息態(tài)星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)長的突起相比,兩組O+D活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體肥大,突起增粗深染,呈高度分支狀;此外,許多6w O+D組GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)了胞體類似崩解的退行性改變。(6)電鏡結(jié)果顯示6w O+D組大鼠海馬內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)了糖原顆粒和膠質(zhì)纖維絲的聚集或缺失、線粒體的腫脹或分布異常為特征的退行性改變。尤其在海馬突觸密集的區(qū)域,水樣變性的星形膠質(zhì)細(xì)胞突起高度腫脹,包繞著變性的突觸結(jié)構(gòu)。此外,在許多2w和6w O+D組大鼠海馬腦毛細(xì)血管周圍包繞著許多腫脹的星形膠質(zhì)細(xì)胞終足。尤其在6w O+D組大鼠毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)扭曲變形和空泡化。上述病理改變并沒有在C組出現(xiàn)。(7)6w O+D組大鼠的海馬及大腦皮質(zhì)的一些區(qū)域出現(xiàn)了血管周圍區(qū)域HRP的泄漏。而在C組HRP反應(yīng)產(chǎn)物則分布在血管內(nèi),沒有明顯的外泄。 結(jié)論:1.雌激素剝奪和氧化應(yīng)激在AD發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用。2.OVX結(jié)合注射D-gal可以作為一個(gè)較好模擬AD病癥的動(dòng)物模型。3.星形膠質(zhì)細(xì)胞在此模型病變的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 程琦;程曉娟;姜國鑫;;我國阿爾茨海默病流行病學(xué)研究[J];內(nèi)科理論與實(shí)踐;2007年02期

2 吳樂,陳文軍;雌激素的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)理[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2005年01期

3 楊建華;;阿爾茨海默病病因及發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2006年18期

4 沈玉先,楊軍,魏偉,劉麗華,徐叔云;β-淀粉樣多肽25～35片段誘導(dǎo)的大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2001年01期

5 曾昭毅;楊雨;苗婷;潘婭;王旭東;蔣乃昌;;岡田酸對(duì)擬AD模型大鼠海馬CA_1區(qū)Aβ1-40和nNOS表達(dá)的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2006年06期

6 丁正明,宮斌,莫啟忠;老年癡呆動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2000年10期

7 聶偉,張永祥,周金黃;雌激素對(duì)卵巢切除大鼠海馬長時(shí)程增強(qiáng)的影響[J];中國神經(jīng)科學(xué)雜志;2001年04期

8 曾芳;余曙光;唐勇;邵欣;;老年性癡呆復(fù)合動(dòng)物模型研究概況(綜述)[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2007年04期

9 ;PROTECTIVE EFFECT OF TETRAMETHYLPYRAZINE ON LEARNING AND MEMORY FUNCTION IN D-GALACTOSE-LESIONED MICE[J];Chinese Medical Sciences Journal;2004年03期

本文編號(hào)：2781783