【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),又稱老年癡呆癥,是一種神經(jīng)退行性疾病,病理特征表現(xiàn)為患者腦中存在由于β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)沉積形成的老年斑和由于Tau蛋白異常磷酸化導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié),同時普遍伴隨腦內(nèi)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)干細(xì)胞功能的激活。AD炎癥反應(yīng)主要由腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞,穿過血腦屏障的外周單核細(xì)胞等被激活,分泌炎性細(xì)胞因子、趨化因子等引起~([1])。而在AD腦中炎癥反應(yīng)與其發(fā)生發(fā)展有著密不可分的關(guān)系。其中AD患者和腦內(nèi)注射Aβ大鼠外周血單核細(xì)胞均高表達(dá)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)受體β亞基—CSF2RB,但AD患者CSF2RA(GM-CSF受體α亞基)表達(dá)與同齡對照老年人比無顯著差異。上述結(jié)果提示CSF2RA和CSF2RB的表達(dá)差異是與腦內(nèi)Aβ炎癥相關(guān)的。單核細(xì)胞入腦后會分化為巨噬細(xì)胞,為了研究Aβ對巨噬細(xì)胞GM-CSF受體表達(dá)的影響與巨噬細(xì)胞功能的關(guān)系,我們用Aβ1-42合成肽在體外刺激小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7,與LPS刺激結(jié)果相對比研究Aβ1-42對RAW264.7細(xì)胞炎癥因子表達(dá)、分泌的影響及機(jī)制。研究方法:RAW264.7細(xì)胞分別經(jīng)過LPS與Aβ1-42刺激,RT-PCR和Western Blot檢測GM-CSF受體CSF2RA和CSF2RB的表達(dá)水平;ELISA檢測在Aβ1-42刺激下的炎癥因子GM-CSF、IL-1β、IL-6和TNF-α水平;采用TLR4抑制劑分別干預(yù)LPS和Aβ1-42處理后的RAW264.7細(xì)胞,檢測CSF2RA與CSF2RB受體的表達(dá)變化,炎癥因子IL-1β、IL-6的釋放;流式細(xì)胞術(shù)檢測Aβ1-42刺激的RAW264.7細(xì)胞分化類型。實驗結(jié)果:RAW264.7細(xì)胞表面GM-CSF受體CSF2RA與CSF2RB在LPS與Aβ1-42處理后表達(dá)均升高,且CSF2RA先于CSF2RB升高,與對照組相比具有顯著性差異(p0.05);炎癥因子IL-6與IL-1β在Aβ1-42刺激后分泌增加,并且TLR4在Aβ引起的炎癥因子的釋放中發(fā)揮作用。結(jié)論:1、巨噬細(xì)胞RAW264.7在Aβ1-42/LPS刺激下,CSF2RA與CSF2RB均升高,CSF2RA先于CSF2RB升高。2、Aβ1-42通過TLR4受體的作用使巨噬細(xì)胞炎癥因子IL-1β和IL-6分泌增加。
【圖文】：

11圖 2 CSF2RA 和 CSF2RB 在 RAW264.7 細(xì)胞上的表達(dá)；(A、B)：采用 RT-PCR 技術(shù)檢測 CSF2RA 和 CSF2RB 的表達(dá)；(C)：采用 westernblot 方 CSF2RA 和 CSF2RB 的表達(dá)； (D)：CSF2RA 蛋白表達(dá)水平的統(tǒng)計分析；(E)：CSF2R達(dá)水平的統(tǒng)計分析。采用單因素方差分析，n=3，，*P<0.05 或**P<0.01

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 Aβ1-42 能夠促進(jìn) RAW264.7 細(xì)胞炎癥因子的釋放文獻(xiàn)表明，LPS 能刺激細(xì)胞釋放 IL-1β、IL-6 和 TNF-α等炎癥因子[18,19]，為一步研究 Aβ對巨噬細(xì)胞的促炎作用，我們檢測了 Aβ1-42 刺激后 RAW264.7 細(xì)癥因子的釋放。結(jié)果表明, IL-6 在 12、24 和 48h 有升高(P㩳0.05)，在 72h 和明顯升高（P㩳0.01） （圖 3 A）；IL-1β在 12、24h 有升高(P㩳0.05)，在 48、h 有明顯升高（P㩳0.01）（圖 3 B），但是 TNF-α的表達(dá)沒有明顯差異（圖 3些結(jié)果提示 Aβ對 RAW264.7 細(xì)胞具有促炎作用。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16

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1 仲建春;杜q

本文編號：2646878