發(fā)布時間：2020-04-01 20:59

【摘要】：目的眾所周知,來源于促黑素細胞皮質(zhì)素原(proopiomelanocortin,POMC)的黑皮質(zhì)素受體興奮劑α-黑素細胞刺激激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)以及拮抗劑刺鼠相關蛋白(agouti-related protein,AgRP),對代謝應激非常敏感,比如饑餓、低血糖。然而,這些神經(jīng)元對情緒及生理應激的機制尚不明確。據(jù)報道,黑皮質(zhì)素信號通路對急性情緒應激快速反應,并導致厭食以及焦慮樣行為發(fā)生,誘發(fā)弓狀核(arcuate nucleus,ARC)中POMC和AgRP神經(jīng)元c-fos表達。與此同時,研究證實慢性不可預測應激(chronic unpredictable stress,CUS)誘導大鼠認知功能缺陷和焦慮樣行為發(fā)生,可以通過慢性抗焦慮藥物治療來阻止。因此,我們想要明確是否黑皮質(zhì)素信號通路與慢性應激導致的認知和情緒障礙的潛在神經(jīng)生物學機制相關聯(lián)。如果真的存在,弓狀核中POMC和AgRP神經(jīng)元又是如何對慢性不可預測應激做出應答的是我們研究的關鍵。方法利用基因型為AgRP-Ires-cre純合小鼠和基因型為C57BL的小鼠進行交配,得到基因型為AgRP-Ires-cre的雜合小鼠,AgRP-Ires-cre的雜合小鼠與AgRP-Ires-cre的雜合小鼠再進行交配,得到AgRP-Ires-cre純合小鼠和AgRP-Ires-cre雜合小鼠。使用基因型為POMC cre(Lowell B)雜合小鼠和基因型為C57BL的小鼠進行交配,得到基因型為POMC cre(Lowell B)雜合小鼠。使用特異性的受體激活劑(DREADD)激活設計的受體的技術來特異性調(diào)節(jié)神經(jīng)元活性,我們激活AgRP-Ires-cre 小鼠 cre-dependent DREADD-hM3Dq AAV 表達,進而激活 AgRP 神經(jīng)元;激活 POMC cre(Lowell B)小鼠 cre-dependent DREADD-hM4Di AAV 表達,進而激活POMC神經(jīng)元。首先將6周左右雄性轉(zhuǎn)基因小鼠在病毒注射前進行了雌鼠尿液嗅覺實驗(Female Urine Sniffing test,FUST),平均分為 2 組(mcherry、hm3d-mcherry組或mcherry、hm4d-mcherry組)。病毒注射后2周左右表達。病毒注射2周后,小鼠接受10天的慢性不可預測應激(CUS)。在第11天,重復雌鼠尿液嗅覺實驗(FUST)判斷造模是否成功。接下來,在第12天,腹腔注射clozapine-N-oxide(CNO)重復雌鼠尿液嗅覺實驗(FUST)。在第13天,腹腔注射 clozapine-N-oxide(CNO)我們進行了糖水偏好實驗(sucrose preference test,SPT)。在第14天,腹腔注射clozapine-N-oxide(CNO)我們進行了強迫游泳實驗(forced swim test,FST)。在第 15 天,腹腔注射 clozapine-N-oxide(CNO)我們進行了自發(fā)活動實驗。結(jié)果抑郁樣行為的實驗評估中,我們發(fā)現(xiàn)在慢性不可預測應激后雌鼠尿液嗅覺實驗中hm3d-mcherry組小鼠雌鼠尿液嗅探時間低于mcherry組但沒有顯著性,而在執(zhí)行慢性不可預測應激后雌鼠尿液嗅探時間較病毒注射前明顯下降(P0.05),結(jié)果說明造模是成功的。hm3d-mcherry組小鼠在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實驗中雌鼠尿液嗅探時間高于mcherry組但沒有顯著性,但是在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實驗中雌鼠尿液嗅探時間較慢性不可預測應激后有所升高。使用成對t檢驗,在mcherry組,在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實驗中雌鼠尿液嗅探時間較慢性不可預測應激后有升高趨勢,而在hm3d-mcherry組在CNO注射后雌鼠尿液嗅覺實驗中雌鼠尿液嗅探時間較慢性不可預測應激后顯著升高(P0.05)。類似的結(jié)果也出現(xiàn)在hm4d-mcherry組和mcherry組。在CNO注射后的糖水偏好實驗中,hm3d-mcherry組與mcherry組在12小時以及14小時的糖水偏好百分比沒有顯著性差別(P0.05)。在CNO注射后的強迫游泳實驗中,hm3d-mcherry組與mcherry組在前2分鐘的潛伏期以及后4分鐘的不動時間上沒有顯著差異(P0.05)。在CNO注射后的自發(fā)活動實驗中,hm3d-mcherry組與mcherry組在沒有顯著差異(P0.05)。hm4d-mcherry組與mcherry組在CNO注射后的糖水偏好實驗、強迫游泳實驗以及自發(fā)活動實驗中沒有顯著差異(P0.05)。結(jié)論由此得出,在弓狀核中激活AGRP神經(jīng)元或抑制POMC神經(jīng)元翻轉(zhuǎn)慢性不可預測應激誘導的小鼠抑郁樣行為。
【圖文】：

AGRP小鼠在病毒注射前進行雌鼠尿液嗅覺實驗

=Po}c小鼠在病毒注射前進行雌鼠尿液嗅覺實驗
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R749

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