本文選題：阿爾茨海默癥 + ADAM10　； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:ADAM10作為a分泌酶,可使APP代謝為sAPPα,一方面減少毒性Aβ的生成,另一方面其產物sAPPα在腦內具有重要生理功能。本實驗前期研究通過中藥單體高通量藥物掃描發(fā)現,促胰島細胞分化藥物Conophylline(CNP)可明顯增強ADAM10基因啟動子區(qū)(-508—-30)的熒光素酶活性。目的:旨在從細胞水平探究Conophylline對ADAM10及AD的作用及調節(jié)機制。方法:qPCR、熒光素酶活性實驗檢測細胞水平CNP對ADAM10轉錄的影響;Western Blot檢測ADAM10、APP代謝蛋白、Tau磷酸化水平;Si-RNA研究CNP對ADAM10的調節(jié)元件。結果:(1)Conophylline能有效促進SH-SY5Y、HT22和HEK293細胞株ADAM10 mRNA和蛋白水平的表達。(2)Conophylline可抑制穩(wěn)定過表達APP細胞株HEK-APP中β分泌酶--BACE1,APP代謝產物β-CTF的表達。(3)Conophylline使LC3(LC3-II)表達增高,提示Conophylline可能通過自噬調節(jié)CTFs。(4)Conophylline可抑制內源Total-Tau、p Ser396 Tau、p Ser262 Tau和相關激酶CDK5的表達。(5)Conophylline可激活ADAM10基因核心啟動子區(qū)不同片段(-508—-300,-467—-300,-444—-300)的熒光活性。其中,對-508—-467區(qū)域作用明顯。(6)Si-RNA分別抑制ADAM10啟動子-508—-300區(qū)核心轉錄因子Sp1、USF1及CAAT-BOX結合元件NF-YB后,發(fā)現Conophylline主要通過CAAT-BOX調節(jié)元件發(fā)揮對ADAM10的調控作用。(7)PI3K抑制劑/自噬抑制劑Wortmannin,能抑制Conophylline對ADAM10的影響。自噬作用可能參與了Conophylline對ADAM10的作用。結論:本研究揭示了一種新的小分子中藥單體Conophylline對阿爾茨海默病的保護作用,并對其可能參與的機制進行了探究,為下一步動物水平研究奠定實驗基礎。
[Abstract]:Background: as a secretory enzyme, 1: ADAM10 can metabolize app to sAPP 偽. On the one hand, it can reduce the formation of toxic A 尾, on the other hand, its product sAPP 偽 has important physiological functions in the brain. In the early stage of this experiment, we found that Conophylline (CNP) can obviously enhance the luciferase activity of ADAM10 gene promoter region (-508-30) by high-throughput drug scanning of traditional Chinese medicine monomer. Aim: to investigate the effects and regulatory mechanisms of Conophylline on Adam10 and AD at cellular level. Methods the effect of CNP on the transcription of ADAM10 was detected by cell level CNP assay. Western blot was used to detect the phosphorylation level of ADAM10APP metabolizing protein, Tau phosphorylation level. The regulatory elements of CNP on ADAM10 were studied by Si-RNA. Results Conophylline could effectively promote the expression of mRNA and protein of ADAM10 in SH-SY5YTH-HT22 and HEK293 cell line. Conophylline inhibited the expression of 尾 -secretory enzyme 尾 -CTF in stable over-expressed app cell line, and the expression of 尾 -CTF, the metabolite of 尾 -CTF, increased in HEK293 cell line. It is suggested that Conophylline may inhibit the fluorescence activity of endogenous Total-Taup Ser396 Taup Ser262 Tau and associated kinase CDK5 by regulating CTFs.4Conophylline by autophagy. Conophylline can activate the fluorescence activity of different fragments in the core promoter region of ADAM10 gene, namely -508-300-467-300-444--300). Among them, after inhibiting the core transcription factor Sp1 USF1 and CAAT-BOX binding element NF-YB, the ADAM10 promoter -508-300 region was significantly inhibited by -508-467 si-RNA. It was found that Conophylline could inhibit the effect of Conophylline on ADAM10 mainly through CAAT-BOX regulatory element. The PI3K inhibitor / autophagy inhibitor Wortmanninin could inhibit the effect of Conophylline on ADAM10. Autophagy may be involved in the effect of Conophylline on ADAM 10. Conclusion: this study revealed the protective effect of a new small molecule Chinese medicine monomer Conophylline on Alzheimer's disease and explored the possible mechanism of its participation in order to lay an experimental foundation for the further study on animal level.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R749.16

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本文編號：2000653