本文關(guān)鍵詞：美金剛聯(lián)合豐富環(huán)境對快速衰老小鼠學習記憶能力及突觸可塑性相關(guān)蛋白的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京醫(yī)科大學》 2013年

美金剛聯(lián)合豐富環(huán)境對快速衰老小鼠學習記憶能力及突觸可塑性相關(guān)蛋白的影響

杜明洋  

【摘要】：背景 阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease, AD），最早由德國神經(jīng)病學專家AloisAlzheimer于1907年提出，是一種以慢性、進行性認知功能減退伴有精神行為異常為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是老年性癡呆的主要類型。其中學習記憶能力的減退是阿爾茨海默病早期和最突出的癥狀，隨著病情的進展逐漸出現(xiàn)認知功能損害、精神行為異常、社交能力障礙等表現(xiàn)，給家庭及社會帶來了沉重的負擔，嚴重影響患者工作和生活。AD主要的特征性病理改變?yōu)棣?淀粉樣蛋白(Aβ)異常聚集所形成的老年斑(senile plaques，SP)、神經(jīng)細胞內(nèi)tau蛋白異常磷酸化所導致的神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles，，NFTs)、大腦皮層和海馬等區(qū)內(nèi)廣泛的神經(jīng)元缺失，以及海馬錐體細胞的顆�？张葑冃浴⑤S索、突觸的異常斷裂和血管淀粉樣變等。 近年來，國內(nèi)外學者針對AD機制的研究和臨床治療相繼建立了許多動物模型，如轉(zhuǎn)基因動物模型、損害中樞膽堿能系統(tǒng)動物模型、Aβ模型和自身免疫模型等。這些模型均不能很好地模擬AD發(fā)病的特征。研究發(fā)現(xiàn)快速衰老小鼠（Senescence accelerated mouse prone，SAMP8）主要以學習記憶功能呈增齡性加速衰退為特征。在其5月齡時皮質(zhì)、紋狀體、海馬即可發(fā)現(xiàn)有Tau蛋白的高度磷酸化和β淀粉樣蛋白的異常蓄積。其所表現(xiàn)的認知行為能力的減退，記憶皮層海馬等區(qū)的神經(jīng)病理學改變更加接近于自然老化的腦組織改變和AD的病理特征，是一種自然發(fā)病模型，因此SAMP8是目前研究老齡化相關(guān)學習記憶功能損害基本機制較理想的動物模型，也逐漸被作為評價藥物療效、研究AD病理機制的常用模型。 美金剛，作為中等親和力、非競爭性的N甲基-D天冬氨酸受體（NMDAR）的拮抗劑，可以選擇性地阻斷NMDAR過度激活，減少谷氨酸興奮性毒作用，同時對正常生理活動的NMDAR阻斷作用較弱，被認為對神經(jīng)細胞有較好的保護作用。已分別于2002年和2003年被歐洲CPMP和美國FDA批準用于中、重度AD的治療。研究證實，美金剛能夠通過有效降低神經(jīng)細胞內(nèi)Ca2+的濃度，減少神經(jīng)元遲發(fā)型損傷及氧自由基釋放。同時，還可以有效地降低tau蛋白的過磷酸化和抑制可溶性Aβ的表達，改善AD患者的認知功能障礙和精神行為異常。另外流行病學報道稱，處于豐富環(huán)境也可以延緩AD的發(fā)展；大量的動物實驗亦證實，豐富環(huán)境有助于改善學習記憶能力，其可能機制是降低海馬組織淀粉樣蛋白的表達，增加海馬區(qū)突觸相關(guān)蛋白及神經(jīng)營養(yǎng)因子的mRNA表達。 大量研究發(fā)現(xiàn)，AD患者不僅表現(xiàn)出突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)量的變化，并且可能存在對突觸可塑性起關(guān)鍵作用的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、酪氨酸激酶受體B（trkB）、突觸囊泡蛋白（SYP）、突觸后致密物（PSD-95）等突觸可塑性相關(guān)的蛋白表達異常。這些突觸可塑性相關(guān)蛋白的減少可以導致AD患者腦內(nèi)神經(jīng)元的缺失，神經(jīng)細胞凋亡，軸突變性以及神經(jīng)遞質(zhì)合成、運輸?shù)恼系K，從而引起學習記憶能力的降低。因此，BDNF、trkB、SYP和PSD-95表達的變化很可能與AD認知功能變化存在密切的關(guān)系。 在本實驗中我們選取快速衰老小鼠SAMP8作為研究對象，旨在觀察美金剛聯(lián)合豐富環(huán)境對其認知及精神行為的影響，及影響SAMP8小鼠學習記憶的可能機制，同時探討兩因素聯(lián)合是否影響更加顯著?為預防和控制AD提供可能的理論依據(jù)。 目的 探討美金剛聯(lián)合豐富環(huán)境對快速衰老小鼠（SAMP8）空間學習記憶能力改善和海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、酪氨酸蛋白激酶受體B（TrkB）及突觸囊泡蛋白（SYP）、突觸后致密物（PSD-95）表達的影響。 方法 將6月齡雄性SAMP8小鼠，隨機分為4組：標準環(huán)境組（對照組，SE）﹑豐富環(huán)境治療組(環(huán)境組，EE)﹑美金剛治療組(美金剛組，SM)和美金剛聯(lián)合豐富環(huán)境組（聯(lián)合治療組，EM），每組各6只。治療8周后，采用Morris水迷宮檢測小鼠空間學習記憶能力和開放場實驗檢測小鼠探索運動能力及焦慮樣行為，分別通過Western Blotting和Real-time PCR技術(shù)檢測小鼠海馬BDNF、trkB、SYP和PSD-95蛋白及mRNA表達情況。 結(jié)果 Morris水迷宮： ①定位航行試驗：與對照組比較，環(huán)境組、美金剛組小鼠在試驗第3d起尋找到平臺的潛伏期明顯縮短，聯(lián)合治療組小鼠在試驗第2d起的逃避潛伏期明顯縮短（P0.05~0.01）；且聯(lián)合治療組小鼠在試驗第4d時的逃避潛伏期明顯短于環(huán)境組和美金剛組（均P0.05）；②空間探索試驗：與對照組比較，其余3組小鼠穿越平臺次數(shù)明顯增多(P0.05~0.01)；且聯(lián)合治療組小鼠穿越平臺次數(shù)明顯多于環(huán)境組和美金剛組（均P0.05）。同時，美金剛組和聯(lián)合治療組小鼠在目的象限花費的時間也明顯增多(P0.05~0.01)；但是豐富環(huán)境組、美金剛和聯(lián)合治療組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 開放場實驗： ①與對照組比較，其他3組小鼠的穿格數(shù)（水平探索能力）及直立次數(shù)（垂直探索能力）均明顯增多（P0.05~0.01），環(huán)境組、美金剛組與聯(lián)合治療組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；②與對照組比較，環(huán)境組及美金剛組小鼠的理毛次數(shù)、排便次數(shù)均明顯減少（P0.05），且聯(lián)合治療組排泄次數(shù)減少更加顯著（P0.01），但是干預組之間的差異仍無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 Real-time PCR結(jié)果： 與對照組比較，美金剛組和聯(lián)合治療組小鼠海馬BDNFmRNA、SYPmRNA和PSD-95mRNA表達均明顯增多，且具有統(tǒng)計學意義（P0.01），其中聯(lián)合治療組BDNFmRNA表達明顯高于環(huán)境組與美金剛組（均P0.05）；與對照組比較，環(huán)境組小鼠海馬BDNFmRNA、SYPmRNA表達亦明顯增多（P0.05~0.01），但在PSD-95mRNA表達水平上差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；各組小鼠海馬TrkBmRNA表達的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 Western Blotting結(jié)果： 與對照組比較，美金剛組和聯(lián)合治療組小鼠海馬BDNF、trkB、SYP和PSD-95蛋白表達均明顯增多，且具有統(tǒng)計學意義（P0.05~0.01）；環(huán)境組小鼠海馬BDNF、trkB和SYP蛋白表達水平較對照組亦明顯增多（P0.05~0.01），但PSD-95蛋白表達水平較對照組增加不明顯（P0.05）；且聯(lián)合治療組小鼠海馬在BDNF、trkB和PSD-95蛋白表達水平上均明顯高于環(huán)境組與美金剛組（P0.05~0.01）。 結(jié)論 1、美金剛和豐富環(huán)境可以明顯改善SAMP8小鼠的空間學習記憶能力、增加小鼠的自主活動和減少焦慮樣行為，并且兩者聯(lián)合改善空間學習記憶能力作用明顯優(yōu)于單一治療。 2、美金剛和豐富環(huán)境可以增加SAMP8小鼠海馬BDNF、trkB、SYP和PSD-95蛋白表達及BDNF、SYP和PSD-95mRNA表達，尤以兩者聯(lián)合的效果更加明顯；同時推測通過上調(diào)SAMP8小鼠海馬BDNF、trkB、SYP和PSD-95蛋白及基因的表達可能是美金剛和豐富環(huán)境改善SAMP8的空間學習記憶能力的機制之一。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16;R965
【目錄】：

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本文編號：171247